[發明專利]一種生產飼用抗菌肽的家蠶生物反應器及其構建方法

無效

• 申請號: 201310236840.3
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN103421844A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 李帥偉;李本濤
• 申請（專利權）人: 廣州格拉姆生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C12N7/01;C07K14/435
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• 代理人: 暫無信息

1.一種表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，包括：牛蛙抗菌肽temporin-1Sd和天蠶素AD基因序列或將其與綠色熒光蛋白融合后，將它們克隆到桿狀病毒轉移載體中，構建得到轉移表達載體；將構建的轉移表達載體與桿狀病毒DNA在大腸桿菌中進行轉座重組，獲得重組桿狀病毒；將重組桿狀病毒感染昆蟲宿主；培養被感染的昆蟲宿主表達相應的牛蛙抗菌肽temporin-1Sd和天蠶素AD；收獲并干燥處理所表達的抗菌肽。

2.按照權利要求1所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于所述的抗菌肽牛蛙抗菌肽temporin-1Sd和天蠶素AD的核苷酸序列如序列表中的序列1和序列2所示，相應的氨基酸序列如序列表中的序列3和序列4所示。

3.按照權利要求1所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于所述的桿狀病毒運載載體選自pfastbac-dul雙啟動子，可以同時表達兩種抗菌肽或同一種抗菌肽的兩個拷貝。

4.按照權利要求1所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于所述構建得到的轉移表達載體是帶有抗菌肽基因原始序列的載體pfast-temporin-1Sd-AD，pfast-cecropin?AD-AD，和帶有抗菌肽融合蛋白序列的載體pfast-temporin-1Sd-gfp-AD，pfast-cecropin?AD-gfp-AD。

5.按照權利要求1所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于所述的桿狀病毒DNA為BmNPV。

6.按照權利要求1所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于所述的重組桿狀病毒選自以下任意一種重組病毒：重組家蠶核型多角體病毒rBmNPV-temporin-1Sd-cecropinAD；重組家蠶核型多角體病毒rBmNPV-?temporin-1Sd-gfp-cecropin?AD；重組家蠶核型多角體病毒rBmNPV-?gfp?temporin-1Sd?-cecropin?AD。

7.按照權利要求1所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，特征在于所述的昆蟲宿主包括家蠶、蓖麻蠶、樗蠶、樟蠶、日本柞蠶、柞蠶、野蠶、野天蠶及相應的昆蟲細胞。

8.按照權利要求1所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于所述的昆蟲宿主是家蠶幼蟲和蛹；所述的感染是指重組桿狀病毒通過吞食或透過表皮來感染1-5齡的昆蟲幼蟲或蛹體。

9.按照權利要求8所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于，所述的感染1-5齡的昆蟲幼蟲或蛹體將重組家蠶桿狀病毒感染家蠶細胞或穿刺接種1-5齡的家蠶幼蟲或蛹，在感染3-6天后收集家蠶幼蟲或蛹的體液或組織勻漿。

10.按照權利要求9所述的表達牛蛙抗菌肽?temporin-1Sd和天蠶素cecropin?AD的方法，其特征在于所述的蛹體為1-2天的早期嫩蛹。