[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)TTR基因突變G307C的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310236550.9
• 申請(qǐng)日: 2013-06-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103266181A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚永剛;張阿梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 昆明今威專利商標(biāo)代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)導(dǎo)致遺傳性玻璃體淀粉樣變患者視力嚴(yán)重?fù)p傷或喪失的TTR基因突變G307C的試劑盒，屬于遺傳性視力研究技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)：

家族遺傳性淀粉樣變（Familial?amyloidotic?polyneuropathy,FAP;?MIM#105210）是一種常染色體顯性遺傳性代謝病，能夠引起多個(gè)器官組織的病變，該病可以累及腎臟、心臟、外周神經(jīng)、玻璃體等組織或器官。家族性淀粉樣變性在世界多個(gè)國(guó)家有報(bào)道，患者常在他們30-40歲期間發(fā)病。很多基因的突變是家族性淀粉樣變性的致病因素，其中最常報(bào)道的基因是轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白基因（transthyretin，TTR）的突變，約99%的家族淀粉樣變性患者是由TTR基因突變?cè)斐傻摹TR基因編碼的蛋白以四聚體的形式存在，它主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)甲狀腺素和維生素A。TTR蛋白僅存在于脊椎動(dòng)物中并且保守性很高。目前為止，已有超過(guò)100個(gè)TTR基因的突變導(dǎo)致的FAP被報(bào)道，其中患者人群中發(fā)生頻率最高的突變是TTR蛋白的第30位的纈氨酸突變成蛋氨酸，特別是在日本、瑞典和葡萄牙人群中該突變所占比例更高。該病的具體發(fā)病機(jī)理尚未明確，肝移植手術(shù)是目前有效的治療方法，但是由于肝源和手術(shù)費(fèi)用的限制，這一治療方法在臨床上的應(yīng)用較局限。?

家族性淀粉樣變性患者的臨床表型異質(zhì)性現(xiàn)象非常明顯，具有相同TTR基因突變的不同淀粉樣變家系，其臨床表型可能完全不同。有一些家族性淀粉樣變性的患者首先出現(xiàn)或唯一累及的器官是玻璃體，這類家系為遺傳性玻璃體淀粉樣變家系。玻璃體淀粉樣變（Familial?hereditary?vitreous?amyloidosis,?HVA）是一種臨床癥狀僅（或主要）表現(xiàn)為無(wú)誘因性視力嚴(yán)重?fù)p傷甚至喪失的遺傳病，絕大多數(shù)也是由TTR基因的突變導(dǎo)致疾病的發(fā)生，這類患者的的發(fā)病年齡也多為30-40歲之間，早期正確的診斷可以提高該病的治愈效率。我國(guó)有關(guān)FAP疾病的病例?報(bào)道較少，也許是由于目前臨床上缺乏準(zhǔn)確的分子診斷方法。目前為止，發(fā)現(xiàn)9個(gè)中國(guó)HVA家系被報(bào)道，其中6個(gè)家系是由TTR基因的突變G307C（p.G83R）致病（其中包括我們發(fā)現(xiàn)了3個(gè)HVA家系），即TTR基因編碼序列307位的鳥(niǎo)嘌呤突變成胞嘧啶，這導(dǎo)致了TTR蛋白第83位的甘氨酸突變?yōu)榫彼帷?

由于HVA患者能夠通過(guò)進(jìn)行玻璃體切除填充術(shù)進(jìn)行治療，且其治療效果與發(fā)病時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)，因此臨床上對(duì)該類患者的早期確診，有助于臨床治療。突變p.G83R在中國(guó)HVA家系中發(fā)生的頻率高達(dá)67%，對(duì)中國(guó)HVA患者的這一突變進(jìn)行檢測(cè)，將極大的提高臨床確診率，有效的縮短診斷時(shí)間，提高治愈率，在臨床應(yīng)用上有重要價(jià)值。HVA患者TTR基因突變的檢測(cè)，不僅能有效的應(yīng)用于臨床診斷和治療，還能應(yīng)用于產(chǎn)前診斷和新生兒遺傳疾病的篩查，進(jìn)行提早干預(yù)，從而減輕家庭和社會(huì)負(fù)擔(dān)。此外，通過(guò)對(duì)HVA患者的TTR基因G307C的檢測(cè)，還有助于我們研究和了解HVA的致病機(jī)理，為后續(xù)開(kāi)展基因治療奠定基礎(chǔ)。?

經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見(jiàn)與本發(fā)明檢測(cè)突變位點(diǎn)相同的公開(kāi)報(bào)道。?

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測(cè)TTR基因突變G307C的試劑盒。?

本發(fā)明通過(guò)檢測(cè)來(lái)自患者的樣本中是否存在TTR基因突變G307C（p.G83R），進(jìn)而判斷該患者失明的遺傳致病因子和疾病類型。其中，所述的p.G83R指由TTR基因的編碼序列307位堿基突變（G307C）導(dǎo)致的該蛋白第83位的中性的甘氨酸變?yōu)閴A性的精氨酸，這一氨基酸改變導(dǎo)致了TTR蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，使其功能改變從而致病。?

發(fā)明人用候選基因篩查的方法，在中國(guó)3個(gè)玻璃體淀粉樣變家系中發(fā)現(xiàn)與這些家系失明相關(guān)的TTR基因的突變G307C。在這些遺傳性失明的家系中，先證者和其他患者該位點(diǎn)突變均以雜合子的形式存在，而家系中未發(fā)病的正常人未檢測(cè)到這一突變的存在，說(shuō)明該突變與疾病的表型連鎖關(guān)系緊密，是這3個(gè)家系失明患者的致病因素。目前，中國(guó)已發(fā)現(xiàn)9個(gè)由該基因突變導(dǎo)致的遺傳性玻璃體淀粉樣變的家系，其中6個(gè)家系存在突變G307C，說(shuō)明TTR基因的G307C突變?cè)谥袊?guó)玻璃體淀粉樣變家系中具有較高的頻率，能夠作為中國(guó)此類疾病患者臨床診斷的依據(jù)。目前國(guó)際上尚未見(jiàn)TTR基因G307C突變的報(bào)道。?

本發(fā)明的用于檢測(cè)TTR基因突變G307C的試劑盒，包括用于檢測(cè)位于TTR基因的突變G307C所需試劑和能選的用于擴(kuò)增TTR基因的試劑，及PCR引物。?

用于檢測(cè)TTR基因突變G307C的試劑盒，包括下述以下一種或幾種試劑的組合：?

a.從待測(cè)樣品中提取DNA的試劑；?