[發(fā)明專利]一種富硒沼澤紅假單胞菌制劑及其制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310234383.4 | 申請日： | 2013-06-14 |
| 公開（公告）號： | CN103284029A | 公開（公告）日： | 2013-09-11 |
| 發(fā)明（設計）人： | 李帥偉;李本濤 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣州格拉姆生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A23L1/03 | 分類號： | A23L1/03;A23K1/00;A23K1/16;C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 沼澤 紅假單胞菌 制劑 及其 制備 方法 | ||
1.一種富硒沼澤紅假單胞菌制劑的制備方法包括以下步驟：
??（1）?菌種活化：
???本發(fā)明采用沼澤紅假單胞菌活菌作為發(fā)酵菌種，購于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GIM1.167，將-80℃保存的沼澤紅假單胞菌活菌菌種在種子培養(yǎng)基（蛋白胨3g，酵母膏3g，?MgSO4·7H2O?0.5g，無水CaCl2?0.3g，瓊脂粉15g，調(diào)pH7.0，蒸餾水1000ml，高溫高壓滅菌）試管斜面上劃線，光照強度3000~5000lx，30℃培養(yǎng)96個小時左右；
???（2）制備一級種子：
將活化的沼澤紅假單胞菌活菌，用接種環(huán)挑取一環(huán)接種于20mL種子培養(yǎng)基（蛋白胨3g，酵母膏3g，MgSO4·7H2O?0.5g，無水CaCl2?0.3g，調(diào)pH7.0，蒸餾水1000ml，高溫高壓滅菌）的試管中，然后加入無菌的液體石蠟至厚度為1~2cm，光照強度3000~5000lx，30℃靜置培養(yǎng)96個小時左右；若培養(yǎng)基滅菌后未立即使用，則需在沸水浴中加熱10min驅(qū)氧后使用；
???（3）制備二級種子：
經(jīng)過優(yōu)化后的沼澤紅假單胞菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：乙酸鈉3.5g，氯化銨0.6g，KH2PO4?1.0g，硫酸鎂?0.5g，酵母膏1.5g，加蒸餾水750?mL稀釋，調(diào)pH7.0，并加水至1L，攪拌均勻，經(jīng)121℃、20min高溫高壓滅菌；在無色透明的細口瓶的液體培養(yǎng)基中，以10~35%的比例接入一級種子液，加入無菌的液體石蠟至厚度為1~2cm，光照強度3000~5000lx，30℃靜置培養(yǎng)96個小時左右（活菌數(shù)達到3×109?CFU/mL?左右）；
（4）三級大瓶培養(yǎng)：
培養(yǎng)基：乙酸鈉3.5g，氯化銨0.6g，KH2PO4?1.0g，硫酸鎂?0.5g，酵母膏1.5g，加蒸餾水或冷開水750?mL稀釋，調(diào)pH7.0，并加水至1L，攪拌均勻，然后加入無菌的液體石蠟至厚度為1~2cm，培養(yǎng)基加入透明聚乙烯桶內(nèi)（容量為5?L、10L、15L或者更大），裝液量為40%左右，以10~35%的比例接入二級種子液，保持溫度為30~35℃，pH?7.0-8.0，光照強度3000~10000
lx，從靜置培養(yǎng)的第2、3、4和5天分別添加亞硒酸鈉至25、50、75和100ug/mL，繼續(xù)培養(yǎng)至第7天后，培養(yǎng)液中硒的濃度下降為10?ug/mL左右，硒的轉(zhuǎn)化率可達90%以上，菌體富硒量可達到75mg硒每克干菌種，有機硒含量為97%以上；將透明聚乙烯桶放在遮陽網(wǎng)下面進行培養(yǎng)，所有聚乙烯桶要避免陽光直曬，光照強度3000~10000lx，每天上午搖動聚乙烯桶一次，每次搖動10下，觀察生長情況；在培養(yǎng)過程中，各聚乙烯桶內(nèi)培養(yǎng)液的顏色變化均由淡黃、橙黃、淺紅色到紫紅色，所不同的是紫紅色的顯現(xiàn)時間；
（5）收集富硒沼澤紅假單胞菌菌體并制劑：
將紫紅色的發(fā)酵液經(jīng)過低溫離心后，收集菌體并加入保護劑進行凍干干燥或者65℃下加溫處理60min以內(nèi)，經(jīng)過干燥和包裝，制成可用于人類食品的富硒沼澤紅假單胞菌制劑；
也可以將紫紅色的發(fā)酵液用植物淀粉吸附并干燥制成畜禽飼料添加劑：以玉米粉、小麥粉或豆餅粉，或者其任意組合，作為紫紅色發(fā)酵液的吸附劑，并將植物淀粉吸附的發(fā)酵液混合物進行烘干干燥，經(jīng)過粉碎和包裝，制成用于畜禽養(yǎng)殖的微生態(tài)飼料添加劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒沼澤紅假單胞菌制劑，其特征在于所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基為：乙酸鈉3.5g，氯化銨0.6g，KH2PO4?1.0g，硫酸鎂?0.5g，酵母膏1.5g，自來水或者冷開水進行配制。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒沼澤紅假單胞菌制劑，其特征在于：培養(yǎng)溫度為溫度為30~35℃，pH?7.0~8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒沼澤紅假單胞菌制劑，其特征在于：各級種子菌接種量為10~35%的接種量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒沼澤紅假單胞菌制劑，其特征在于：所用的菌種為紅假單胞菌屬沼澤紅假單胞菌種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒沼澤紅假單胞菌制劑，其特征在于：該沼澤紅假單胞菌活菌制劑的應用領(lǐng)域為人類食品或者畜禽飼料添加劑。
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