[發明專利]豬流感病毒H3亞型膠體金檢測試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310234084.0
• 申請日: 2013-06-13
• 公開（公告）號: CN103336121A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 金梅林;明曉;但漢并;李淑云;王盛羽;郭學波;張安定;周紅波
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;C12N5/20
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新;王和平

1.一種豬流感病毒H3亞型膠體金檢測試劑盒，包括檢測試紙，所述檢測試紙包括PVC底板、濾樣紙、免疫膠體金墊、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，所述濾樣紙、免疫膠體金墊、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙依次首尾銜接并固定于襯底上，其特征在于：所述免疫膠體金墊上包被有膠體金標記的單克隆抗體2B8和4H9，所述免疫硝酸纖維素膜上設有包被有單克隆抗體1F6和3D1的檢測線和包被有抗鼠IgG抗體的質控線，

所述單克隆抗體3D1是由雜交瘤細胞株3D1所分泌的，所述單克隆抗體2B8是由雜交瘤細胞株2B8所分泌的，所述單克隆抗體4H9是由雜交瘤細胞株4H9所分泌的，所述單克隆抗體1F6是由雜交瘤細胞株1F6所分泌的，所述雜交瘤細胞株2B8、4H9、1F6、3D1保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號依次為CCTCC?NO：C201375、CCTCC?NO：C201376、CCTCC?NO：C201377、CCTCC?NO：C201374。

2.根據權利要求1所述的豬流感病毒H3亞型膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）制備膠體金；

2）用步驟1)?制備的膠體金分別標記單克隆抗體2B8和4H9，獲得膠體金標記的單克隆抗體2B8和4H9；

3）免疫膠體金墊的制備：預處理玻璃纖維紙；濃縮步驟2)?獲得的膠體金標記的單克隆抗體2B8和4H9，得到免疫膠體金溶液；用所述免疫膠體金溶液包被預處理過的玻璃纖維紙，獲得免疫膠體金墊；

4)?將單克隆抗體1F6、3D1和抗鼠IgG抗體分別噴在硝酸纖維素膜檢測線和質控線的位置上，烘干備用，制得免疫硝酸纖維素膜；

5)?將濾樣紙、免疫膠體金墊、免疫硝酸纖維素膜、吸水紙依次粘貼在PVC底板上，切裁制得試紙條；

6)?將試紙條裝入塑料盒，即獲得豬流感病毒H3亞型膠體金檢測試劑盒。

3.根據權利要求2所述的豬流感病毒H3亞型膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：所述膠體金的顆粒直徑為35nm。

4.根據權利要求2所述的豬流感病毒H3亞型膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟4）中先將單克隆抗體1F6噴于硝酸纖維素膜的檢測線上，隔0.3毫米再將單克隆抗體3D1噴于硝酸纖維素膜的檢測線上。

5.根據權利要求2所述的豬流感病毒H3亞型膠體金檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：所述濾樣紙的處理液中含有20mMTris-Cl、0.5%PVP-40、2%蔗糖、1%NaCl、1%酪蛋白，pH值為9.0。

6.權利要求1所述的膠體金檢測試劑盒在豬流感病毒H3亞型抗原體外檢測中的應用。