[發明專利]一種酶法水解結合閃式提取快速從松針中提取脂溶性葉綠素的方法

無效

• 申請號: 201310233947.2
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN103275090A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 歐陽杰;占汝真;武健;方麗穎
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C07D487/22
• 分類號: C07D487/22;C12P17/18
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技術領域

本發明屬于食品生物技術領域，特別涉及一種酶法水解結合閃式提取快速從松針中提取脂溶性葉綠素的方法。

背景技術

食品的色、香、味和形式是評價食品表現質量的四大基本參數，也是消費者選擇食品的重要依據。為了保持和改善食品的色澤，在食品加工過程中往往需要對食品進行人工著色。食用色素就是使食品著色和改善食品色澤的一類添加劑，也常稱為著色劑。

食用色素按其來源和性質可分為食用合成色素和食用天然色素兩大類。食用合成色素是用化學合成方法所得到的色素，而食用天然色素則是來源于天然原料，經過分離純化得到的色素。由于食用合成色素有的毒性較大，會直接危害人體健康，甚至有些合成色素有致癌或誘導染色體畸變的作用，因此相繼從各國許可使用色素的名單上撤除，有些國家甚至完全禁止使用合成色素。

葉綠素是存在于植物體內的一種天然綠色素，存在于葉綠體中，是葉綠酸與葉綠醇和甲醇所形成的脂。天然提取的葉綠素含有a、b兩種結構，顏色分別為藍色和黃綠色，比例為3∶1，可用層析分離，其不穩定且不溶于水。葉綠素具有吸收光能的性質，是光合作用的主要物質，其吸收光的波峰值在610-680nm之間。葉綠素作為從綠色植物中提取的一種天然色素，具有安全無毒、著色自然鮮艷等優點，廣泛應用于食品、化妝品及藥物的著色等方面(孫立人等，中藥大辭典.北京：人民衛生出版社，2001，361-362)。

葉綠素有助于消除體內積累的二惡英，在二惡英由肝臟排除而被小腸吸收之前葉綠素使二惡英附在其上面然后排出體外，同時葉綠素也能有效地降低致癌物質的毒性。作為食品添加劑，它能改善食品的色澤、香味，從而增加食欲；在醫藥方面，葉綠素本身及衍生物對內、外科各種疾病具有良好的醫療效果，實驗已證明葉綠素中所含葉綠素a的藥物功效能使人體組織細胞的活性增強，在臨床醫學上葉綠素a可防止傷口感染，具有收斂傷口，促進愈合的作用，它對消化道潰瘍和消化道炎癥也有極好的輔助治療作用，能促進大小腸的蠕動，利于治療老年人便秘。

葉綠素含有一個由4個吡咯環連成的一個平面大環，中間與一個鎂離子結合，不同的葉綠素在毗咯環上含有不同的取代基團。其中心鎂離子極不穩定，在酸性條件下會被H⁺所取代，發生格林反應而脫色降解；反應隨酸性的增強和溫度的增加而加快(Fischer?&?Steern，Die?Chemie?des?Pyrrols，Vol.2，Academic?Press?Leipzig1940.)，氧對葉綠素的裂環脫色降解有著重要意義。葉綠素內部的氧化酶和外部的光都必須在有氧分子存在的條件下才能發生4吡咯環的斷裂而脫色降解(Dilung?&?Karpitskaya，Photochemical?oxidation?of?chlorophyll?in?frozen?solutions，Dokl.Akad.Nauk.S.S.S.R.1963.152.367.)；葉綠體進行光合作用時產生的活性氧也可能參加了對葉綠素4吡咯環的破壞。

從綠色植物中提取葉綠素的傳統工藝是有機溶劑浸提法(洪法水.菠菜葉綠素的浸提和協同萃取.應用化學，2001，18(7)：53-55)。該法的缺點是操作費時麻煩、溶劑消耗量大、毒性大、成本高，并且是在高溫下，容易致使提取率低。因此，利用酶法水解與閃式提取結合的方法將色素快速地釋放出來能極大減少操作量，節省溶劑并提高葉綠素的穩定性。纖維素酶是分解植物纖維素的酶，通過破壞植物細胞壁，可以有效提高天然提取物的提取率(季大洪等，高新工程技術在中藥提取分離中應用[J].時珍國醫國藥，2000，11(4)：369-370)。關于纖維素酶破壞樣品細胞壁并且釋放出葉綠體的研究較少，而以閃式提取輔助破碎植物細胞的研究更少。當將葉綠素以酶法水解的方法提取處理后，結合閃式提取，可以在短時間內增大植物細胞的破壞程度，快速提取葉綠素。

松針中含有豐富的葉綠素，以它作為原料來提取葉綠素、β-胡蘿卜素、葉黃素等都已實現工業化生產，但都是以丙酮等有機溶劑萃取的方法進行提取，提取時間長。本發明是以纖維素酶酶法水解結合閃式提取的方法，快速并大量地提取松針中的葉綠素。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用酶法水解結合閃式提取快速從松針中提取脂溶性葉綠素的方法。先將新鮮的植物原料干燥后粉碎成粉，過篩得到較細粉末，加水浸泡，然后與纖維素酶混合攪拌，在適宜條件下反應一段時間后，加入石油醚，再用閃式提取器進行提取。最后離心取得上層有機相液體，減壓濃縮后即得到脂溶性的葉綠素浸膏。

本發明的實施方案如下：