[發明專利]鼠痘病毒的GFP示蹤系統及其應用

有效

• 申請號: 201310231634.3
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN103333866A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 劉京梅;常國輝;孫走南;楊益;蘇文莉;唐玥;何湘
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍疾病預防控制所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/63;A01K67/027;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.重組鼠痘病毒，是將野生型鼠痘病毒基因組DNA進行替換或插入得到的重組病毒；

所述替換為：將所述野生型鼠痘病毒基因組DNA中的片段a中的任一片段替換為片段b；

所述插入為：在所述野生型鼠痘病毒基因組DNA中的所述片段a中的任一位點處插入所述片段b；

所述片段a為序列表中序列1所示DNA片段；所述片段b為含有綠色熒光蛋白的編碼基因的DNA片段。

2.根據權利要求1所述的重組鼠痘病毒，其特征在于：所述綠色熒光蛋白的氨基酸序列如序列表中序列2所示。

3.根據權利要求2所述的重組鼠痘病毒，其特征在于：所述綠色熒光蛋白的編碼基因為序列表中序列3的第142-861位。

4.根據權利要求1-3中任一所述的重組鼠痘病毒，其特征在于：所述含有綠色熒光蛋白編碼基因的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列3。

5.根據權利要求1-4中任一所述的重組鼠痘病毒，其特征在于：所述野生型鼠痘病毒為野生型鼠痘病毒Moscow株；

所述插入中，所述片段a中的任一位點處為所述片段a中的序列1的第478位和第479位之間的位置。

6.根據權利要求5所述的重組鼠痘病毒，其特征在于：所述重組鼠痘病毒的基因組DNA的序列為在GenBank號為NC_004105.1的序列的第89518位和第89519位之間插入序列表中序列3后得到核苷酸序列。

7.制備權利要求1-6中任一所述重組鼠痘病毒的方法，包括如下步驟：

（a）將權利要求1-5任一中所述的野生型鼠痘病毒基因組DNA中位于待取代核苷酸序列或待插入位點上游和下游的序列分別克隆至質粒pSV2-gpt的gpt基因的上游和下游，得到重組質粒甲；

所述待取代核苷酸序列或待插入位點位于序列1中；

（b）用所述野生型鼠痘病毒感染CV-1細胞后，用步驟（a）獲得的重組質粒甲轉染所述CV-1細胞，所述野生型鼠痘病毒與所述重組質粒甲通過所述位于待取代核苷酸序列或待插入位點上游和下游的序列發生同源重組，獲得以所述gpt基因替代所述野生型鼠痘病毒中的所述待取代核苷酸序列，或在所述野生型鼠痘病毒中的所述待插入位點處插入所述gpt基因的重組鼠痘病毒載體甲；

（c）將步驟（a）中的所述重組質粒甲中的所述gpt基因替換為權利要求1-4任一中所述的含有綠色熒光蛋白的編碼基因的DNA片段，得到重組質粒乙；

（d）用步驟（b）得到的重組鼠痘病毒載體甲感染新的CV-1細胞后，用步驟（c）獲得的重組質粒乙轉染所述新的CV-1細胞，所述重組鼠痘病毒載體甲與所述重組質粒乙通過所述位于待取代核苷酸序列或待插入位點上游和下游的序列發生同源重組，獲得以所述含有綠色熒光蛋白的編碼基因的DNA片段替代所述重組鼠痘病毒載體甲中所述gpt基因的重組鼠痘病毒載體乙，所述重組鼠痘病毒載體乙即為權利要求1-6中任一所述重組鼠痘病毒。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法的步驟（a）中，位于待取代核苷酸序列或待插入位點上游和下游的序列分別為GenBank號為NC_004105.1的序列的第89041-89518位和第89519-90053位的序列。

9.權利要求1-6中任一所述重組鼠痘病毒在如下（a1）或（a2）中的應用：

（a1）制備研究鼠痘病毒感染機制的產品；

（a2）制備篩選抗鼠痘病毒藥物的細胞模型。

10.如下（b1）或（b2）的生物材料：

（b1）含有權利要求1-6中任一所述重組鼠痘病毒的離體動物細胞或重組菌；

（b2）含有權利要求1-6中任一所述重組鼠痘病毒的基因組RNA或cDNA的載體。