[發明專利]輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒的引物組及其應用

有效

• 申請號: 201310231244.6
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN104232787A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 劉金華;蒲娟;魏延迪;裴星瑤;俞晨芳;張谞霄;齊魯
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒的引物組及其應用。

背景技術

豬流感一種急性、傳染性呼吸道疾病，影響豬的發育，延緩豬的生長及出欄時間，給養殖業帶來重大經濟損失。豬流感病毒主要包括H1與H3兩種亞型。其中歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒是H1亞型豬流感病毒的一大優勢譜系。2006年以后，歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒成為豬流感病毒的優勢流行毒株。

傳統的流感病毒檢測方法為采用雞胚進行病毒的分離培養（需時2-3天），然后采用血凝抑制試驗進行流感病毒亞型及分支的鑒定（需時1天）。這種傳統的檢測方法費時、費力，不能做出快速而及時的診斷。由于流感病毒抗原特性的變異，常常導致常規血清學方法無法檢出流行毒株，出現漏檢的情況。此外，用于豬流感檢測的鼻腔拭子樣品通常病毒含量較低，由于普通RT-PCR方法的靈敏度限制，易出現假陰性結果。臨床上，迫切需要一種能快速有效的檢測歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒的方法，有助于實現對該疾病的實時監測，對于疫情的防控意義重大。

發明內容

本發明的目的是提供一種輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒的引物組及其應用。

本發明提供的引物組，包括引物對乙；所述引物對乙由序列表的序列3所示單鏈DNA分子和序列表的序列4所示單鏈DNA分子組成。所述引物組還可可包括引物對甲；所述引物對甲由序列表的序列1所示單鏈DNA分子和序列表的序列2所示單鏈DNA分子組成。所述引物組可由所述引物對乙和所述引物對甲組成。

本發明還保護所述引物組在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的用途為如下（a）或（b）：（a）輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒；（b）輔助鑒定待測樣本中是否含有歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒。所述待測樣本可為豬的肝、腦、肺等組織，也可為豬的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子樣品。所述待測樣本還可為食品，所述食品為豬的內臟組織（肝、腦、肺等）或豬的內臟組織（肝、腦、肺等）加工得到的生鮮食品或熟食。

本發明還保護一種試劑盒，包括所述引物組；所述試劑盒的用途為如下（a）或（b）：（a）輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒；（b）輔助鑒定待測樣本中是否含有歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒。所述待測樣本可為豬的肝、腦、肺等組織，也可為豬的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子樣品。所述待測樣本還可為食品，所述食品為豬的內臟組織（肝、腦、肺等）或豬的內臟組織（肝、腦、肺等）加工得到的生鮮食品或熟食。

本發明還保護所述引物組在輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒中的應用。所述應用中不包括疾病治療和診斷方法。

本發明還保護第一種輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒的方法，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，用所述引物對乙進行PCR擴增，如果得到PCR擴增產物、待測病毒為候選的歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒，如果沒有得到所述PCR擴增產物、待測病毒為候選的非歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒。所述PCR擴增產物的大小可為400-500bp,具體可為462bp。所述待測病毒可為歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒、H9N2亞型豬流感病毒、H3N2亞型豬流感病毒、H1N2亞型豬流感病毒和經典H1N1亞型豬流感病毒。所述方法為非疾病治療和診斷方法。

本發明還保護第二種輔助鑒定歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒的方法，依次包括如下步驟：（1）以待測病毒的cDNA為模板，用所述引物對甲進行PCR擴增；（2）將完成步驟（1）的體系作為模板，用所述引物對乙進行PCR擴增，如果得到PCR擴增產物、待測病毒為候選的歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒，如果沒有得到所述PCR擴增產物、待測病毒為候選的非歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒。所述PCR擴增產物的大小可為400-500bp,具體可為462bp。所述待測病毒可為歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒、H9N2亞型豬流感病毒、H3N2亞型豬流感病毒、H1N2亞型豬流感病毒和經典H1N1亞型豬流感病毒。所述方法為非疾病治療和診斷方法。

本發明還保護所述引物組在輔助鑒定待測樣本中是否含有歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒中的應用。所述待測樣本可為死亡的豬的肝、腦、肺等組織，也可為死亡的豬的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子樣品。所述待測樣本還可為食品，所述食品為豬的內臟組織（肝、腦、肺等）或豬的內臟組織（肝、腦、肺等）加工得到的生鮮食品或熟食。所述應用中不包括疾病治療和診斷方法。