[發(fā)明專利]一種從莫勒菌中提取麥角固醇的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310229946.0
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN103265599A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邱君志;李小霞;郭慶豐;何肖云;張以盼;曹麗萍;凃潔;孟麗雪;董冬;姚靈丹
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從莫勒菌中提取麥角固醇的方法。

背景技術(shù)

莫勒菌（Moelleriella?ochracea）是粉虱的重要病原真菌，因此其經(jīng)常被用于粉虱的生物防控，而且取得了顯著效果。近年來，人們把目光轉(zhuǎn)移到其代謝產(chǎn)物上來，已分離到一些有生物活性的物質(zhì)，如具有抗菌、抗腫瘤和抗瘧原蟲等生物活性的化合物。

麥角固醇是一種重要的醫(yī)藥化學(xué)原料，可用于考的松和激素黃體酮等藥物和農(nóng)藥的使用，它還是維生素D的前體，可用于保健類食品及藥品添加，具有進(jìn)一步研究開發(fā)的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種從莫勒菌中提取麥角固醇的方法，以促進(jìn)其進(jìn)一步在醫(yī)藥和食品中的開發(fā)，為人類造福。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種從莫勒菌中提取麥角固醇的方法，包括以下步驟：

1）取保存于實(shí)驗室的莫勒菌菌株（邱君志等，赭色小莫勒菌在中國的發(fā)現(xiàn).?菌物學(xué)報，2009.28(1):?148-150）（體積分?jǐn)?shù)為25%的甘油保存），在無菌條件下，用接種環(huán)取少量菌塊在無菌水中清洗掉甘油，然后涂布于含馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的平板上，25℃下培養(yǎng)一周時間。

2）待莫勒菌活化后，160~200?r/min、23~28℃條件下連續(xù)培養(yǎng)8~12?d即初級培養(yǎng)，按8％~10％接種量轉(zhuǎn)接到M102培養(yǎng)基中，繼續(xù)在160~200?r/min、23~28℃下連續(xù)培養(yǎng)25~30?d即次級培養(yǎng)。

3）減壓抽濾得到菌絲體，菌絲體在35~40℃下干燥后研磨成粉狀，用2~4倍甲醇浸泡1~3天，超聲40~60?min，旋蒸得菌絲體浸膏。

4）將菌絲體浸膏用盡可能少的氯仿溶解（可適當(dāng)超聲，以促進(jìn)其溶解），然后用硅膠進(jìn)行拌樣。上硅膠柱，以石油醚：乙酸乙酯體積比為30:?1梯度洗脫，收集石油醚：乙酸乙酯體積比為5:?1部位洗脫液，旋蒸濃縮。

5）將以上得到的化合物，用乙酸乙酯洗出，甲醇重結(jié)晶，得到白色粉末。

所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的制備為：200?g馬鈴薯，沸水煮30?min，經(jīng)6層紗布過濾后加20?g葡萄糖，15g瓊脂，加單蒸水定容至1L，121℃高壓滅菌，20?min。

所述M102培養(yǎng)基的制備為：蔗糖30.0?g，KCl?0.5?g，MgSO4·7H₂O?0.5?g，KH₂PO₄?0.5?g，溶于雙蒸水定容至1?L，121℃高壓滅菌，20?min。

所述步驟4）中拌樣硅膠是160~200目的粗硅膠，進(jìn)行梯度洗脫所用硅膠是200~300目細(xì)硅膠；進(jìn)行梯度洗脫時，換洗脫液體系體積比為5個跨度：30:1，25:1，20:1，15:1，10:1，5:1。

所述步驟5）中重結(jié)晶具體操作為：用乙酸乙酯將得到的含有少量雜質(zhì)的麥角固醇溶解，自然揮干，待晶體析出后，再用甲醇洗去雜質(zhì)，析出棄掉，剩余的晶體再用甲醇溶解后重結(jié)晶，直至獲得單一的麥角固醇。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：

（1）莫勒菌繁殖快，取材方便；

（2）分離純化簡單，成本低；

（3）制得的化合物含量多，且純度高。

附圖說明

圖1是化合物的TLC，化合物經(jīng)薄層層析TLC、濃硫酸顯色為紫紅色，說明其為甾類物質(zhì)。

圖2是化合物的EI-MS譜，顯示化合物的相對分子量為396。

圖3是化合物的¹H?NMR譜(CDCl₃)，表明該化合物存在6個甲基信號。

圖4是化合物的¹³C?NMR譜(CDCl₃)，顯示該物質(zhì)28個碳信號。

圖5是化合物的?DEPT?135譜(CDCl₃)，表明化合物存在4個季碳、7個仲碳。

圖6是化合物的平面結(jié)構(gòu)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1)取保存于實(shí)驗室的莫勒菌菌株（25%甘油保存），在無菌條件下，用接種環(huán)取少量菌塊在無菌水中清洗掉甘油，然后涂布于含馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的平板上，25℃條件下培養(yǎng)一周時間。