[發明專利]一種扁座殼孢菌蛋白酶的分離純化方法

無效

• 申請號: 201310229944.1
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN103266098A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 邱君志;曹麗萍;涂潔;李小霞;孟麗雪;張以盼;董冬;何肖云;郭慶豐;姚靈丹
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N9/58
• 分類號: C12N9/58;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種扁座殼孢菌蛋白酶的分離純化方法，其特征在于：包括粗酶液過濾、硫酸銨鹽析、Sephadex?G-75凝膠過濾、DEAE?Sepharose?fast?flow陰離子交換層析。

2.根據權利要求1所述的扁座殼孢菌蛋白酶的分離純化方法，其特征在于：包括以下步驟：

(a)?粗酶液的制備：用優化試驗篩選出的培養基培養菌株，在蛋白酶活性達最高時取發酵液離心，上清液用真空抽濾，收集濾液，向濾液中加入固體硫酸銨至飽和度為70%，4℃靜置過夜，再次離心收集沉淀，用緩沖液溶解沉淀，離心溶解液除去不溶物體，上清液裝于透析袋，經0.02?mol/L?Tris-HCl緩沖液透析后，再用聚乙二醇PEG20000濃縮得到粗酶液；

Sephadex?G-75?凝膠過濾層析：用0.02mol/L?Tris-HCl緩沖液充分平衡Sephadex?G-75凝膠層析柱，上樣后，再用0.02mol/L?Tris-HCl緩沖液進行洗脫，收集具有酶活的洗脫液；

Sepharose?fast?flow陰離子交換層析：具活性的酶液經過PEG20000適當濃縮后，用0.02mol/LTris-HCl緩沖液平衡過夜，上樣于充分平衡后的DEAE?Sepharose?fast?flow陰離子交換層析柱，再用含0-1?mol/L?NaCl的0.02mol/L?Tris-HCl緩沖液進行鹽離子梯度連續洗脫，收集具有酶活的洗脫液。

3.?根據權利要求2所述的扁座殼孢菌蛋白酶的分離純化方法，其特征在于：步驟?(a)?中三次離心溫度均為4℃，每次10min，離心轉速分別為8000?r/m；10000?r/m；12000?r/m。

4.?根據權利要求2所述的扁座殼孢菌蛋白酶的分離純化方法，其特征在于：步驟?(b)、(c)?中洗脫條件分別為：流速30mL/h，5mL/管；流速15mL/h，5mL/管。