[發明專利]一種裸花紫珠脫毒微繁方法

有效

• 申請號: 201310229432.5
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN104221852B
• 公開（公告）日: 2017-04-19
• 發明（設計）人: 張影波;于福來;李偉;龐玉新;谷陟欣;黃勝;徐向平;王丹;官玲亮;袁莉
• 申請（專利權）人: 九芝堂股份有限公司;海南九芝堂藥業有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種裸花紫珠的組培快速繁殖的技術，本發明屬于種子種苗、農業生物技術和藥用植物栽培領域。

背景技術

裸花紫珠（Callecarpa. nudiflora Hook. et Arn）為馬鞭草科紫珠屬植物，以其干燥葉片入藥，收載于《中國藥典》1977 年版。具有止血散瘀、抗菌消炎之功效，是裸花紫珠片、裸花紫珠分散片、裸花紫珠膠囊、裸花紫珠顆粒、裸花紫珠栓等近40余種中成藥的重要原料。由于裸花紫珠為重要的醫藥原料，野生資源破壞嚴重，采集野生資源已經不能滿足生產需要，開展規范化生產是解決藥材短缺的有效途徑，而種苗繁育是規范化生產的重要組成部分，由于裸花紫珠果實成熟周期較長，種子成熟度不一，加上種子狹小，種皮堅硬，于是裸花紫珠種苗繁育周期較長，出苗不一致，遠遠不能滿足市場的需要，這使裸花紫珠在我國境內的推廣栽培和資源利用受到了極大的限制。

利用植物組織培養技術建立裸花紫珠脫毒微繁體系是生產優質裸花紫珠優質種苗的有效途徑，其關鍵技術之一在于脫毒方法的建立、微枝培養、增殖培養和生根培養，不同激素組合及其濃度對此影響很大。CN102870678A公開了一種組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法，通過利用扦插繁殖的裸花紫珠的新枝為外植體，進行接種培養、擴繁培養、生根培養、煉苗移栽。國內外尚未見到裸花紫珠果實外植體的組織培養、脫毒微繁等研究的報道，本專利通過對脫毒方法的建立、微枝培養、增殖培養和生根培養，建立了裸花紫珠種子外植體的脫毒微繁方法，為裸花紫珠種苗的工業化生產的奠定了基礎。

發明內容

本發明的目的是為了解決裸花紫珠繁殖周期長、增殖效率低、成本高和遺傳穩定性差的問題，而提供的一種低成本、穩定一致、增殖效率高的裸花紫珠脫毒微繁方法。

裸花紫珠的脫毒微繁方法按以下步驟實現：①外植體消毒，將清洗后的裸花紫珠果實外植體在超凈工作臺上用質量濃度為75%的乙醇溶液浸泡30～60s后，然后用無菌水沖洗3 ～5次，再用質量濃度為0.1%的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用無菌水沖洗3～5次；②無菌苗培養，將種子從消毒后的果實外植體中剝離出，接種于以改良MS固體培養基為基本培養基，且還包含0.01~0.03mg/L的赤霉素、0.01~0.03 mg/L的NAA和質量濃度為2.5~3.0%的蔗糖，pH值為5.6～6.0的誘導培養基，然后在溫度為25～28℃、濕度為70%～80%、光照強度為80～100 lx、光照8～10 h/d的條件下培養至無菌芽長度為0.5～1.0 cm；③微枝培養，將增生的無菌芽一起轉接于以改良MS固培養基為基本培養基，且還包含質量濃度為0.5 ～1.0%的有機附加物，質量濃度為2.5~3.0%的蔗糖，pH值為5.6～6.0的壯苗培養基中，在溫度為25～28℃、濕度為70%～80%、光照強度為50～70 lx、光照8～10 h/d的條件下培養至無菌芽生長長度為15.0～20.0 cm，即為微枝；④增殖培養，將增壯后的微枝切割成帶有1個頂芽或1～2個腋芽、且長度為1.0 ～2.0 cm的莖段然后接種于以改良MS固培養基為基本培養基，且還包含0.5～0.8mg/L的6-BA、0.08～0.1 mg/L的NAA和質量濃度為2.5~3.0%的蔗糖，pH值為5.6～6.0的增殖培養基，在溫度為25～28℃、濕度為70%～80%、光照強度為80～100 lx、光照8～10 h/d的條件下培養，視種苗需求數量可增殖25～30d；⑤生根培養，待微枝生長長度為2.0～3.0 cm，轉接于以改良MS固體培養基為基本培養基且還含0.1%～1.0%活性炭或0.05～0.1 mg/L的NAA和質量濃度為2.5~3.0%的蔗糖，pH值為5.6～6.0的生根培養基中進行生根培養，在溫度為25～28℃、濕度為70%～80%、光照強度為80～100 lx、光照8～10 h/d的條件下培養至裸花紫珠微枝根的生長長度為1.5～2.0 cm；⑥煉苗培養，將生根培養的裸花紫珠苗于隱蔽度為15%～20%的蔭棚，煉苗7～10 d ；⑦將經過煉苗后裸花紫珠苗移栽于含10%～15%蛭石，10%～15%牛糞，10%～15%椰糠和55%～70%腐殖土的育苗杯，即完成裸花紫珠的脫毒微繁。

上述方案中，所述的改良MS固體培養基由1/2MS培養基，增加75.0~100.0 mg/L的肌醇制得。

作為本發明的優選方案，本發明中步驟②無菌苗培養為：將消毒后的裸花紫珠種子接種于以改良MS固培養基為基本培養基，且還包含0.01mg/L的赤霉素、0.01 mg/L的NAA和質量濃度為2.5~3.0%的蔗糖，pH值為5.6～6.0的誘導培養基。