[發(fā)明專利]一種側(cè)胞芽孢桿菌WY9701制劑的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310228526.0
• 申請(qǐng)日: 2013-06-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103283944A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李帥偉;李本濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州格拉姆生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A23K1/00
• 分類號(hào): A23K1/00;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種固體培養(yǎng)基經(jīng)側(cè)胞芽孢桿菌WY9701發(fā)酵制備益生菌飼料添加劑的方法及其在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用。

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背景技術(shù)

側(cè)胞芽孢桿菌（Bacillus?Lateraporus）屬于芽孢桿菌屬（Bacillus），?需氧或兼性厭氧，其細(xì)胞大小為（0.5~0.8）×（2.5~5.0）μm，革蘭氏染色陽(yáng)性，可變?yōu)殛幮裕挎咝螒B(tài)為近中生的為橢圓形，側(cè)生、中生或近中生，孢囊膨大，游離芽胞一邊比另一邊厚（獨(dú)木舟形），大多數(shù)有動(dòng)力，莢膜，通常過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性。側(cè)胞芽孢桿菌是經(jīng)國(guó)家農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)使用的一種天然菌種。側(cè)胞芽孢桿菌具有繁殖快速、生命力強(qiáng)、安全無(wú)毒等特點(diǎn)；側(cè)胞芽孢桿菌能分泌合成多種有機(jī)酸、酶等生理活性物質(zhì)。?

由于側(cè)胞芽孢桿菌WY9701具有芽孢，具有耐酸、耐堿、耐高溫及耐擠壓等特點(diǎn)，可以耐唾液和膽汁的攻擊，是飼料微生物中可直達(dá)大小腸的活菌，在制粒過(guò)程及胃酸環(huán)境中均能保持高度的穩(wěn)定性，在腸道上段迅速發(fā)育轉(zhuǎn)變成具有新陳代謝作用的營(yíng)養(yǎng)型細(xì)胞，以自身的耗氧來(lái)抑制腸道中有害需氧菌的生長(zhǎng)，從而促使以厭氧菌為優(yōu)勢(shì)菌群的腸道正常菌群的生長(zhǎng)，提高機(jī)體免疫力；能降解植物性飼料中某些復(fù)雜的碳水化合物，提高飼料的轉(zhuǎn)化率；能產(chǎn)生多種酶類，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能；側(cè)胞芽孢桿菌WY9701還能產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如維生素、氨基酸、促生長(zhǎng)因子等，參與機(jī)體的生長(zhǎng)代謝，提高生長(zhǎng)速度。此外還能除臭驅(qū)蠅，減少污染，控制細(xì)菌性疾病，能減少糞便中氮、磷、鈣的排泄量，減少糞便臭味及有害氣體排放，從而減少環(huán)境污染。

????目前，側(cè)胞芽孢桿菌WY9701作為一種新型微生態(tài)制劑，在家畜和水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用效果及作用機(jī)理引起了許多學(xué)者的廣泛關(guān)注和研究。

側(cè)胞芽孢桿菌WY9701的作用及使用效果：（1）具有廣譜抗菌作用：側(cè)胞芽孢桿菌WY9701具有廣譜抗菌作用，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、酵母菌和霉菌都有一定的拮抗作用，大量的研究表明，飼用側(cè)胞芽孢桿菌WY9701具有拮抗腸道病原細(xì)菌，維持和調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的作用；（2）增強(qiáng)機(jī)體免疫力：側(cè)胞芽孢桿菌WY9701能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，提高機(jī)體免疫力，是良好的免疫刺激劑，能有效地提高巨嗜細(xì)胞的數(shù)量和活性，通過(guò)產(chǎn)生抗體和提高嗜菌作用等刺激免疫，激發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫，致使動(dòng)物免疫活性增強(qiáng)，芽孢桿菌能促使吞噬細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)，機(jī)體免疫特別是局部免疫提高，分泌型IgA的分泌增加，從而抵抗感染；（3）提高飼料轉(zhuǎn)化率：側(cè)胞芽孢桿菌WY9701制成微生態(tài)制劑飼喂動(dòng)物，均能提高消化道的酶活性，芽孢桿菌能使機(jī)體淀粉酶和總蛋白酶活性升高，對(duì)早期生長(zhǎng)和提高飼料轉(zhuǎn)化率有良好的效果，使動(dòng)物腸道酸化而有利于鐵、鈣及維生素D等的吸收，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，縮短養(yǎng)殖周期。

以往的側(cè)胞芽孢桿菌WY9701的發(fā)酵方式主要存在以下問(wèn)題和不足：（1）大量采用胰化蛋白胨、酵母提取物、牛肉浸膏及其酶解產(chǎn)物等作為培養(yǎng)基主要營(yíng)養(yǎng)成分，生產(chǎn)成本高；（2）?大量采用液體發(fā)酵方式，下游處理工藝復(fù)雜，處理周期長(zhǎng)，對(duì)菌種活性影響較大，成本高；（3）發(fā)酵產(chǎn)物的活菌密度不夠高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種側(cè)胞芽孢桿菌WY9701活菌制劑的制備方法，以克服現(xiàn)有的側(cè)胞芽孢桿菌WY9701活菌制劑的制備方法上存在的上述不足。

????對(duì)側(cè)胞芽孢桿菌WY9701固體發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行單因素試驗(yàn)和5因素3水平正交試驗(yàn)對(duì)其培養(yǎng)基配方進(jìn)行改進(jìn)，得到最佳固體培養(yǎng)基配方，以玉米粉、小麥粉和豆餅粉為基礎(chǔ)料（玉米粉40~70%；小麥粉15~30%；豆餅粉5~15%），葡萄糖1.5%，NaCl?0.6%，KH₂PO_4?0.3%，MnSO₄·H₂O?0.04%。將固體干基加入質(zhì)量比為1:1~2的無(wú)菌水，pH值為自然條件，攪拌均勻。將固體培養(yǎng)基經(jīng)121℃、20min高溫高壓滅菌，待冷卻后即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)基使用。對(duì)側(cè)胞芽孢桿菌WY9701發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化以得到其最佳培養(yǎng)溫度為32.5℃，起始pH值8.0，接種量2%，此條件下側(cè)胞芽孢桿菌WY9701對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期在發(fā)酵18小時(shí)左右。

一種側(cè)胞芽孢桿菌WY9701制劑的制備方法，包括以下步驟：

（1）?制備種子菌；

（2）?配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基并高壓滅菌；

（3）?一級(jí)種子接種并固體發(fā)酵；

（4）將一級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物作為種子接種固體培養(yǎng)基并且進(jìn)行二級(jí)發(fā)酵；