[發(fā)明專利]痘苗病毒的活體成像示蹤系統(tǒng)及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310228384.8 | 申請(qǐng)日： | 2013-06-08 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN103305478A | 公開(kāi)（公告）日： | 2013-09-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 常國(guó)輝;劉京梅;孫走南;楊益;蘇文莉;唐玥;何湘 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)人民解放軍疾病預(yù)防控制所 |
| 主分類號(hào)： | C12N7/01 | 分類號(hào)： | C12N7/01;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/63;A01K67/027;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關(guān)暢 |
| 地址： | 100071*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 痘苗 病毒 活體 成像 系統(tǒng) 及其 應(yīng)用 | ||
1.重組痘苗病毒，是將野生型痘苗病毒基因組DNA進(jìn)行替換或插入得到的重組病毒；
所述替換為：將所述野生型痘苗病毒基因組DNA中的片段a中的任一片段替換為片段b；
所述插入為：在所述野生型痘苗病毒基因組DNA中的所述片段a中的任一位點(diǎn)處插入所述片段b；
所述片段a為序列表中序列1所示DNA片段；所述片段b為含有Gaussia熒光素酶的編碼基因的DNA片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組痘苗病毒，其特征在于：所述Gaussia熒光素酶的氨基酸序列如序列表中序列2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組痘苗病毒，其特征在于：所述Gaussia熒光素酶的編碼基因?yàn)樾蛄斜碇行蛄?的第15-575位。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的重組痘苗病毒，其特征在于：所述含有Gaussia熒光素酶的編碼基因的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的重組痘苗病毒，其特征在于：所述野生型痘苗病毒為野生型痘苗病毒W(wǎng)R株；或
所述插入中，所述片段a中的任一位點(diǎn)處為所述片段a中的序列1的第459位和第460位之間的位置。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組痘苗病毒，其特征在于：所述重組痘苗病毒的基因組DNA的序列為在GenBank號(hào)為NC_006998.1的序列的第80725位和第80726位之間插入序列表中序列3后得到核苷酸序列。
7.制備權(quán)利要求1-6中任一所述重組痘苗病毒的方法，包括如下步驟：
（a）將權(quán)利要求1-5任一中所述的野生型痘苗病毒基因組DNA中位于待取代核苷酸序列或待插入位點(diǎn)上游和下游的序列分別克隆至質(zhì)粒pSV2-gpt的gpt基因的上游和下游，得到重組質(zhì)粒甲；
所述待取代核苷酸序列或待插入位點(diǎn)位于序列1中；
（b）用所述野生型痘苗病毒感染CV-1細(xì)胞后，用步驟（a）獲得的重組質(zhì)粒甲轉(zhuǎn)染所述CV-1細(xì)胞，所述野生型痘苗病毒與所述重組質(zhì)粒甲通過(guò)所述位于待取代核苷酸序列或待插入位點(diǎn)上游和下游的序列發(fā)生同源重組，獲得以所述gpt基因替代所述野生型痘苗病毒中的所述待取代核苷酸序列，或在所述野生型痘苗病毒中的所述待插入位點(diǎn)處插入所述gpt基因的重組痘苗病毒載體甲；
（c）將步驟（a）中的所述重組質(zhì)粒甲中的所述gpt基因替換為權(quán)利要求1-4任一中所述的含有Gaussia熒光素酶的編碼基因的DNA片段，得到重組質(zhì)粒乙；
（d）用步驟（b）得到的重組痘苗病毒載體甲感染新的CV-1細(xì)胞后，用步驟（c）獲得的重組質(zhì)粒乙轉(zhuǎn)染所述新的CV-1細(xì)胞，所述重組痘苗病毒載體甲與所述重組質(zhì)粒乙通過(guò)所述位于待取代核苷酸序列或待插入位點(diǎn)上游和下游的序列發(fā)生同源重組，獲得以所述含有Gaussia熒光素酶的編碼基因的DNA片段替代所述重組痘苗病毒載體甲中所述gpt基因的重組痘苗病毒載體乙，所述重組痘苗病毒載體乙即為權(quán)利要求1-6中任一所述重組痘苗病毒。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法的步驟（a）中，位于待取代核苷酸序列或待插入位點(diǎn)上游和下游的序列分別為GenBank號(hào)為NC_006998.1的序列的第80267-80725位和第80726-81194位的序列。
9.權(quán)利要求1-6中任一所述重組痘苗病毒在如下（a1）或（a2）中的應(yīng)用：
（a1）制備研究痘苗病毒感染機(jī)制的產(chǎn)品；
（a2）制備篩選抗痘苗病毒藥物的細(xì)胞模型。
10.如下（b1）或（b2）的生物材料：
（b1）含有權(quán)利要求1-6中任一所述重組痘苗病毒的離體動(dòng)物細(xì)胞或重組菌；
（b2）含有權(quán)利要求1-6中任一所述重組痘苗病毒的基因組RNA或cDNA的載體。
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