[發明專利]抗β-伴大豆球蛋白的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201310228263.3
• 申請日: 2013-06-08
• 公開（公告）號: CN103333862A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 譙仕彥;付巍;魏寒冰;李悅;張學;何濤
• 申請（專利權）人: 北京龍科方舟生物工程技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/16;G01N33/68;G01N33/577;B01J20/24;B01J20/281;C07K14/415;C07K1/14;C07K1/22
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種抗β-伴大豆球蛋白的單克隆抗體及其應用。

背景技術

大豆中含有豐富的蛋白質，由于其必需氨基酸（如賴氨酸、蘇氨酸和色氨酸）組成比例適宜，是畜禽優質的植物性蛋白源。但大豆中含有的大豆抗原蛋白所導致的動物過敏反應越來越受到人們的關注。在幼齡動物飼料中添加豆粕作為蛋白質來源會導致仔豬、犢牛等的腹瀉、生長性能下降、腸黏膜細胞增生以及免疫功能失調等一系列不良反應，嚴重的甚至導致死亡。

β-伴大豆球蛋白是大豆中主要的致敏蛋白質，占大豆籽實總蛋白的10.0%-12.7%，占總球蛋白的30.0%，其分子量為140—180kDa，是一類糖基化蛋白質，由分子量大小分別為58—77、58—83和42—53kDa的三種亞基組成。β-伴大豆球蛋白具有含量豐富、熱穩定性強、具有較強免疫原性的特點，經常能夠引起過敏反應，如能引起嬰幼兒、5-6%的兒童和2-4%的成年人腹瀉，嚴重的伴有顫抖、咽喉水腫和急性哮喘等癥狀，在畜牧業，β-伴大豆球蛋白能導致斷奶仔豬和妊娠母豬、犢牛、大鼠等幼齡動物的過敏反應，表現為腹瀉、生長性能下降直至死亡。定量檢測不同大豆制品中的β-伴大豆球蛋白的含量具有重要的理論意義及應用價值。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗β-伴大豆球蛋白的單克隆抗體及其應用。

本發明所提供的抗β-伴大豆球蛋白的單克隆抗體，是由雜交瘤細胞株2C4分泌產生的；所述雜交瘤細胞株2C4，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC?No.7109。

所述抗β-伴大豆球蛋白的單克隆抗體可用于檢測或輔助檢測β-伴大豆球蛋白。

所述雜交瘤細胞株2C4或所述抗β-伴大豆球蛋白的單克隆抗體可用于制備檢測或輔助檢測β-伴大豆球蛋白的試劑或試劑盒。

本發明還提供了一種檢測或輔助檢測β-伴大豆球蛋白的試劑盒，該試劑盒中含有獨立包裝的所述抗β-伴大豆球蛋白的單克隆抗體。

所述試劑盒中還可含有獨立包裝的如下1）—9）試劑中的至少一種：

1）包被緩沖液：溶劑為水，溶質為Na₂HPO₄和NaH₂PO₄，所述溶質Na₂HPO₄和NaH₂PO₄在所述包被緩沖液中的濃度分別為2.3g/L和0.45g/L，pH值為7.4；

2）封閉液：溶劑為水，溶質為牛血清白蛋白（BSA）、小牛血清、吐溫-20和蔗糖，所述溶質BSA、小牛血清、吐溫-20和蔗糖在所述封閉液中的濃度分別為10g/L、100ml/L、0.5ml/L和100g/L；

3）PBS緩沖液：溶劑為水，溶質為NaCl、KCl、KH₂PO₄和Na₂HPO₄，所述溶質NaCl、KCl、KH₂PO₄和Na₂HPO₄在所述PBS緩沖液中的濃度為8g/L、0.2g/L、0.2g/L和0.46g/L，pH值為7.4；

4）洗滌液：溶劑為所述PBS緩沖液，溶質為吐溫-20，所述溶質吐溫-20在所述洗滌液中的濃度為50ml/L；

5）抗體稀釋液：溶劑為所述PBS緩沖液，溶質為吐溫-20和明膠，所述溶質吐溫20和明膠在所述抗體稀釋液中的濃度分別為10ml/L和0.01M；

6）終止液：2M的硫酸水溶液；

7）底物液A和底物液B；

所述底物液A：溶劑為水，溶質為過氧化氫脲、Na₂HPO₄、檸檬酸和吐溫-20，所述過氧化氫脲、Na₂HPO₄、檸檬酸和吐溫-20在所述底物液A濃度分別為1g/L、14.2g/L、9.42g/L和0.1ml/L；

所述底物液B：溶劑為水，溶質為四甲基聯苯胺、檸檬酸和硫代硫酸鈉，所述四甲基聯苯胺、檸檬酸和硫代硫酸鈉在所述底物液B中的濃度分別為0.4g/L、1.83g/L和0.1g/L；

8）30×樣品提取液：溶劑為水，溶質為Tris、HCl和β-巰基乙醇，所述Tris、HCl和β-巰基乙醇在所述30×樣品提取液中的濃度分別為Tris181.7mg/L、73ml/L、21ml/L。