[發(fā)明專(zhuān)利]一種海帶種質(zhì)分離的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310225745.3
• 申請(qǐng)日: 2013-06-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103266079A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王翔宇;劉瑋;詹冬梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省海水養(yǎng)殖研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/04
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/04
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國(guó)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海藻種質(zhì)分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種海帶種質(zhì)分離方法。

背景技術(shù)

海帶是一種大型褐藻，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，現(xiàn)已成為我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的支柱產(chǎn)業(yè)。但是因?yàn)槲覈?guó)不是海帶原產(chǎn)國(guó)，養(yǎng)殖原種只有一個(gè)，其生物多樣性低，長(zhǎng)期養(yǎng)殖后，海帶品種嚴(yán)重退化、產(chǎn)量降低，因此人們很重視海帶種質(zhì)采集保存工作。因?yàn)楹渥芋w世代較短，自然狀態(tài)下，一般不超過(guò)14天，所以安全快速的分離海帶種質(zhì)是采集收集種質(zhì)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。海帶種質(zhì)分離的傳統(tǒng)方法是選擇成熟良好的海帶種菜，用消毒海水沖洗后，用紗布對(duì)表面進(jìn)行反復(fù)擦拭，陰干后，放置到消毒的海水中放散游孢子；用消毒海水稀釋游孢子溶液到每視野1-2個(gè)/100X，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中，在12小時(shí)光照，光照強(qiáng)度1000lux，低溫海水的條件下培養(yǎng)8-12天；在10倍顯微鏡下，用消毒的玻璃毛細(xì)管，將初長(zhǎng)成的雌雄單倍體克隆逐個(gè)分出，分別培養(yǎng)。其不足之處有三處，一是由于海帶的粘液較多，直接放入海水中，粘液和雜質(zhì)會(huì)使水質(zhì)變差，影響游孢子的附著和發(fā)育；二是用玻璃毛細(xì)管分離種質(zhì)因?yàn)樾枰斯た刂疲虼诵枰炀毢荛L(zhǎng)時(shí)間，影響分離速度，而且不易控制污染；三是培養(yǎng)液組成不能充分滿(mǎn)足配子體無(wú)污染快速生長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種海帶種質(zhì)分離方法，從而解決海帶種質(zhì)分離易被污染，分離效率低的問(wèn)題，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明的海帶種質(zhì)分離方法，包括如下的步驟：

1）將帶有成熟孢子囊的海帶葉片切割20×20厘米的小塊，然后先用藥用紗布，再用200目篩絹包裹放入盛有消毒海水的容器中，控制水溫在8-12℃，放散游孢子；

2）當(dāng)海水中游孢子密度為5-10個(gè)/100X時(shí)，用紗布過(guò)濾孢子水，并在過(guò)濾后的孢子水中放入載玻片；

3）在光照時(shí)間12h，光照強(qiáng)度800-1200lx，水溫8-12℃的條件下培育7-10天后，使孢子附著在載玻片上培養(yǎng)形成配子體；?

4）將載玻片上的配子體刮到胚胎培養(yǎng)皿中，加入消毒海水稀釋10倍，鏡檢3-5個(gè)/100X，用量程為2μL的移液器，調(diào)至1μL容量，抽取溶液滴至小玻片上，鏡檢選出只存在單個(gè)配子體的玻片；

5）將有單個(gè)配子體的玻片放在盛有培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)，光照強(qiáng)度控制在500-600lx，每天光照12h，水溫控制在8-12℃，完成種質(zhì)分離工作。

其中步驟1）中帶有成熟孢子囊的海帶葉片用消毒紗布清洗擦拭，陰干刺激60-90分鐘后再用手術(shù)刀片切割20×20厘米的小塊；

步驟5）中所用的培養(yǎng)液是以自然海水為基礎(chǔ)，加入如下組分構(gòu)成：8×10^-6g/ml?NaNO₃-N、0.4×10^-6g/ml?KH₂PO₄-P、5-10×10^-6g/ml?GeO₂，10^-7g/ml?Vitamin?H。

本發(fā)明在海帶游孢子放散時(shí)用藥用紗布和篩絹里外包裹可以有效防止海帶粘液和雜質(zhì)影響水質(zhì)；用移液器分離配子體可有效的提高分離效率并避免污染；將培養(yǎng)基加以改善，不但滿(mǎn)足了海帶孢子快速生長(zhǎng)的需求，還可有效的避免了污染，因此，本發(fā)明是一種安全高效的種質(zhì)分離方法。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明通過(guò)單獨(dú)分離配子體，可以快速的分離海帶種質(zhì)；而且，對(duì)于培養(yǎng)時(shí)應(yīng)用的種子液的組分及組分之間的配比，申請(qǐng)人進(jìn)行了長(zhǎng)期的優(yōu)化，從而促成了本發(fā)明。

本發(fā)明所配制的培養(yǎng)液，其組分及配制方法如下：8×10^-3g?NaNO₃-N、4×10^-4g?KH₂PO₄-P、5-10×10^-3g?GeO₂，10^-4g?Vitamin?H，消毒海水1?L。上述的組分及配比，既可以保障海帶配子體快速生長(zhǎng)，又能夠避免培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生雜藻污染。

下面對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行詳細(xì)的描述。

實(shí)施例1

（1）在引種海區(qū)當(dāng)海水溫度到達(dá)16℃時(shí)，采集帶有成熟孢子囊的海帶葉片；

（2）運(yùn)到室內(nèi)，用刀片切割20×20厘米的小塊，然后用消毒紗布擦拭帶有成熟孢子囊的海帶葉片后，陰干刺激1小時(shí)，用紗布和200目篩絹包裹放入盛有消毒海水的容器中，控制水溫在10-12℃，令其孢子放散；