[發(fā)明專利]一類海洋真菌來(lái)源的苯乙酮類化合物及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310225664.3
• 申請(qǐng)日: 2013-06-07
• 公開（公告）號(hào): CN103694209A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 佘志剛;李翰祥;陸勇軍;江潔怡;林少娥;劉昭明;何磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D309/38
• 分類號(hào): C07D309/38;C07C50/38;C07C46/10;C12P7/66;C12P17/06;A61K31/366;A61K31/122;A61P31/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 謝敏楠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一類海洋真菌來(lái)源的苯乙酮類化合物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

海洋真菌來(lái)源廣泛，藥物篩選獲得率高，與其它海洋生物相比，最大的優(yōu)勢(shì)就是對(duì)環(huán)境友好，具有可持續(xù)性發(fā)展的特征。海洋真菌在特殊環(huán)境之中，已發(fā)展出獨(dú)特的代謝方式，能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、生理活性顯著的各類次級(jí)代謝產(chǎn)物。其代謝產(chǎn)物具有抗菌、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、酶抑制等多種藥用價(jià)值。目前，從包括海洋真菌在內(nèi)的海洋微生物中尋找新的藥源已成為國(guó)際國(guó)內(nèi)研究的熱點(diǎn)。

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium?tuberculosis）引起的嚴(yán)重危害人類健康的傳染性疾病。對(duì)結(jié)核病機(jī)理的研究和針對(duì)特異靶點(diǎn)進(jìn)行的抗結(jié)核新藥的研制直接關(guān)系到人類的健康和社會(huì)的發(fā)展。由結(jié)核分枝桿菌分泌的酪氨酸磷酸酶（mPTPB）是結(jié)核分枝桿菌的重要毒力因子，是造成肺結(jié)核的重要原因。mPTPB被結(jié)核分枝桿菌分泌后進(jìn)入巨噬細(xì)胞中，阻止宿主免疫系統(tǒng)的啟動(dòng)，調(diào)節(jié)桿菌在宿主中的存活。mPTPB是結(jié)核藥物篩選新的靶點(diǎn)。抑制結(jié)核桿菌分泌的mPTPB，可以阻止結(jié)核桿菌對(duì)宿主免疫產(chǎn)生抑制作用，有助于宿主對(duì)結(jié)核桿菌產(chǎn)生免疫，從而達(dá)到治療結(jié)核病的目的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中抗結(jié)核病藥物資源不足的缺陷，提供一類新的海洋真菌來(lái)源的苯乙酮類化合物。所述苯乙酮類化合物是從一種海洋真菌青霉Penicillium?sp.?HN4-3A菌株中分離得到的，該化合物對(duì)結(jié)核分枝桿菌酪氨酸磷酸酶（mPTPB）具有抑制作用，可應(yīng)用于制備抗結(jié)核病的藥物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述新的苯乙酮類化合物的制備方法。

本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述苯乙酮類化合物在制備抗結(jié)核病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一類苯乙酮類化合物，結(jié)構(gòu)式如式（Ⅰ）所示：

。

????一類苯乙酮類化合物的制備方法，包括如下步驟：

S1.將海洋真菌青霉Penicillium?sp.?HN4-3A?菌株接入種子培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)，得到種子培養(yǎng)液；

S2.將種子培養(yǎng)液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)；

S3.將步驟S2發(fā)酵后產(chǎn)物過(guò)濾得到菌體和發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取、減壓濃縮，得到浸膏，再經(jīng)層析分離，得到式（Ⅰ）所示苯乙酮類化合物1和2；

海洋真菌青霉Penicillium?sp.?HN4-3A菌株是從中國(guó)海南省海口海域紅樹植物老鼠簕Acanthus?ilicifolius的莖中分離得到。所述海洋真菌青霉Penicilliumsp.?HN4-3A菌株的保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國(guó)武漢市武漢大學(xué)，保藏號(hào)為CCTCC?M?2013233，?保藏日期為2013年5月27日。

作為一種優(yōu)選方案，上述制備方法中，步驟S1所述種子培養(yǎng)基的組分為：葡萄糖35~40g，蛋白胨4~5g，酵母膏4~5g，海鹽4~5g，水2L。步驟S1所述搖床培養(yǎng)是26~28℃下，搖床轉(zhuǎn)速150~200rpm，培養(yǎng)時(shí)間為60~72h。

作為一種優(yōu)選方案，上述制備方法中，步驟S2所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為：葡萄糖2000~2200g，蛋白胨180~200g，酵母膏180~200g，海鹽200~250g，水100L。步驟S2所述靜置培養(yǎng)的時(shí)間為40~50天，靜置培養(yǎng)的溫度為25~28℃。

作為一種優(yōu)選方案，上述制備方法中，步驟S3所述發(fā)酵液是用體積比為1?:1的乙酸乙酯萃取；所述浸膏用硅膠柱層析進(jìn)行分離，分別用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、100%的乙酸乙酯—石油醚梯度淋洗。所述30%乙酸乙酯—石油醚洗脫部分經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠Sephadex?LH-20層析，用體積比為1:1的甲醇-氯仿為洗脫劑進(jìn)行洗脫，洗脫液經(jīng)多次重結(jié)晶得到式（Ⅰ）所示化合物1和2。

本發(fā)明分離得到的苯乙酮類化合物1和2對(duì)結(jié)核桿菌酪氨酸磷酸酶（mPTPB）具有顯著地抑制作用，因此，可用于制備結(jié)核桿菌酪氨酸磷酸酶抑制劑。

因?yàn)槔野彼崃姿崦福╩PTPB）是結(jié)核分枝桿菌的重要毒力因子，是造成肺結(jié)核的重要原因，所以本發(fā)明分離得到的苯乙酮類化合物1和2可用于制備抗結(jié)核病藥物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：