[發明專利]瓊膠寡糖在制備唾液淀粉酶激活劑中的應用

有效

• 申請號: 201310224435.X
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103333876A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 梅建鳳;應國清;鄭蘭娟;王鴻;易喻;陳建澍;張彥璐
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/26;A61K31/729;A61K31/702;A61P1/14
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

（一）技術領域

本發明涉及瓊膠寡糖在制備唾液淀粉酶激活劑中的應用。

（二）背景技術

唾液淀粉酶是一類可將淀粉水解成麥芽糖和糊精的酶，存在于人和一些動物唾液中，是重要的口腔消化酶，影響著機體對糖類物質的消化和吸收。近年來隨著生活水平的提高，加上不健康的飲食習慣，肥胖癥及如何減肥成為人們越來越關注的話題，市場上出現各種減肥藥。然而，還有很大一部分人群，體弱、胃虛或者脾虛，消化不良，導致身體過于消瘦，卻苦于沒有增肥藥。提高唾液淀粉酶的酶促活性，可促進機體對糖類物質的消化和吸收，減輕胃腸道的消化負擔，尋找合適的唾液淀粉酶活性的激活劑，對消化不良患者的治療有一定的意義。瓊膠寡糖（agaro-oligosaccharide）是瓊膠多糖經降解后聚合度為2～10的低聚糖，又稱瓊膠低聚糖，主要由瓊二糖的重復單位連接而成，其水溶性好，有利于人體吸收，在醫藥領域有很高的應用價值。研究表明，瓊膠寡糖具有良好的抗癌、抗氧化、抗炎及抗病毒等生理活性，是一種極具開發潛力的低聚糖。近年來，我國對瓊膠寡糖開展了較多的研究，但未見將瓊膠寡糖作為唾液淀粉酶活性激活劑的報道。

(三）發明內容

本發明目的是提供瓊膠寡糖在制備唾液淀粉酶激活劑中的應用，對于胃腸道保健和消化類疾病的治療的有一定的研究意義。

瓊膠寡糖在制備唾液淀粉酶激活劑中的應用。所述的瓊膠寡糖為聚合度2～10的新瓊寡糖。

所述瓊膠寡糖可按如下方法制得：以瓊膠為底物，以類芽孢桿菌（Paenibacillus?sp.）CCTCC?No：M2011357（該菌株已在在先申請CN102559547A中作為新菌株保護）發酵獲得的瓊膠酶（胞外酶）為催化劑，于37℃下進行酶解，酶解結束后分離獲得所述瓊膠寡糖，對該瓊膠寡糖的成分分析表明，其主要組成是新瓊四糖和新瓊六糖。

因為不同聚合度的寡糖純化的成本較高，限制了其在食品、醫藥等領域的應用，市場未見單一聚合度的寡糖銷售，即便是標準品，也未見銷售。本發明瓊膠寡糖可不經純化而直接使用，這可以大大降低生產成本，為其產業化應用提供依據。

具體的，所述瓊膠寡糖制備方如下：類芽孢桿菌（Paenibacillus?sp.）CCTCC?N_o：M2011357，經斜面活化、種子液培養及搖瓶發酵培養后，于4℃條件下離心（4000～9000r/min、10～30min）或者過濾，分離除去菌體，所得清液即為胞外酶——β-瓊膠酶的粗酶液（具體可參見CN102559547A）。將粗酶液與濃度為1～5g/L的瓊膠溶液以1:1～5的體積比，于37℃水浴中酶解一定時間，沸水浴10min終止酶解，冷卻后離心，取上清液用活性炭進行脫鹽處理，減壓旋蒸濃縮得最終瓊膠寡糖液。

唾液淀粉酶活性的測定方法：唾液淀粉酶活性的測定采用碘比色法，在酶解反應結束時，用硝酸終止反應，以消除寡糖對淀粉碘顯色的影響。

測定唾液淀粉酶活性的步驟為：將1mL待測樣品液、0.5mL?pH為6.8的磷酸緩沖液、0.1mL唾液稀釋液于37℃水浴中結合10min，加入20g/L的淀粉溶液2mL，于37℃水浴中反應20min后取出，加入13%（w/w）硝酸0.5mL終止反應，再加入0.1mmol/L的碘液0.2mL，加水定容至100mL后于分光光度計下測A₆₁₀，計算酶活。

本發明中，唾液淀粉酶的酶活力（U/mL）單位定義為：在一定的反應條件下，1mL唾液稀釋液中含有的唾液淀粉酶20min內水解10mg淀粉為一個酶活單位U。

配制濃度為0.02～2.00mg/mL的瓊膠寡糖，各取1mL，按上述的方法測定唾液淀粉酶在其中的酶活。實驗結果表明，不同濃度的瓊膠寡糖對唾液淀粉酶的活性均有一定的促進作用，且隨著總還原糖濃度的增加而略有增強。在寡糖濃度范圍為0.02～2.00mg/mL時，可將酶活提高1.0～2.2倍。

所述瓊膠寡糖用于制備提高唾液淀粉酶高溫耐受性的制劑。

在磷酸緩沖液存在的情況下，將酶解所制備的瓊膠寡糖和一定量唾液淀粉酶混勻后，于35～55℃水浴中保溫不同時間，按上述的方法測定唾液淀粉酶在其中的酶活。實驗結果表明，瓊膠寡糖的存在可提高唾液淀粉酶的高溫耐受性，使其在35℃～55℃環境中保溫2h仍具有較好的活性，酶活降低幅度小于57%。

所述瓊膠寡糖用于制備提高唾液淀粉酶pH穩定性的制劑。