[發明專利]SPA-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途

無效

• 申請號: 201310223301.6
• 申請日: 2010-01-13
• 公開（公告）號: CN103616516A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 張厚亮
• 申請（專利權）人: 王信
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/544;C12N5/0789
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

本發明是名稱為“SPA-抗體三聚體、含有該三聚體的細胞處理試劑盒及其制備方法和用途”（申請號201010022753.4、申請日2010年01月13日）的發明專利分案申請專利。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，特別是涉及葡萄球菌A蛋白（staphylococalprotein?A，以下簡稱SPA）-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途。

技術背景

SPA能與人及多種哺乳動物血清IgG分子中的Fc片段結合。結合的親和性次序依次是豬、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。SPA除與IgG結合外，還能與血清中少量的IgM和IgA結合，SPA菌對各類免疫球蛋白的吸附率：IgG為90%～98%，IgM為2%～30%，IgA為1.5%～20%。

出現共沉反應的SPA與IgG必須有兩個結合部位，它們分別在Fc和Fab段上,缺一雖能與SPA結合，但不出現共沉反應，這種Fab的參與并非SPA－抗體反應。現已研究表明，IgG與SPA的結合部位是CH₂和CH₃的交界處。

SPA應用很廣，但所有應用的原理都離不開SPA具有與IgG的Fc段的結合能力，主要應用方面如下：

1.SPA菌的協同凝集作用

用已知的標準血清，吸附到SPA菌的表面,使之成為吸附抗體的載體,再以此去診斷相應的未知抗原而產生肉眼可見的凝集顆粒,診斷的抗原可以是顆粒性的,也可以是可溶性的。此種凝集相當于反向間接血凝,但省去間接血凝中的抗體純化,紅血球鞣化等復雜手續,而只需要SPA菌體及粗制免疫血清即可。所以此法簡單、快速,特異性敏感性均較滿意。

2.作為廣譜第二抗體

用SPA代替抗體IgG的第二抗體，有如下優點：①SPA制備容易，性質穩定，易純化，對人和多種哺乳動物的IgG都能應用,不受種屬限制。②SPA的結合力強，相當于游離抗體與抗原的結合力，對人和兔的親和常數均為10³L/克分子，結合后對IgG的活性無影響。無論在0℃、37℃、44℃及56℃幾乎均能立即結合而無需長時間的孵育，因此可以縮短試驗時間；③SPA容易標上¹²⁵I、熒光素、辣根過氧化物酶、鐵蛋白等，因此可與多種技術相結合；④SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fc受體影響，所以有較高的抗IgG特異性。

3.用于提取純化IgG利用SPA與IgG的結合特性提取IgG，比常規采用硫酸銨、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度離心等法要簡便得多，而且純度好。

4.檢測和提純IgM?IgM在病毒的早期診斷中具有重要意義，為了檢測特異性IgM抗體，必須首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的辦法，利用此法也為IgM的提純開辟了道路。

5.其它方面用于免疫復合物的檢測、體外激活補體功能試驗、細胞表面標記以及腫瘤表面抗原的檢測等。

干細胞（stem?cell)是指具有無限或較長期的自我更新能力，并能分化出至少一種高度分化子代細胞的細胞。根據細胞來源將干細胞分成胚胎性干細胞和成體干細胞，而成體干細胞包括自體干細胞和異體干細胞。

目前國內外的最新進展促使“骨髓干細胞”移植血管新生的作用機理、機體內環境對干細胞療效的影響以及轉基因骨髓源干細胞的作用進行進一步的研究，以提高干細胞的治療效果。

臨床上的治療過程中主要采集骨髓或外周血來源的單個核細胞進行移植，并認為其中的CD34+或CD133＋/VEGF-R2+細胞為血管新生的干/祖細胞，但這類細胞的增殖分化功能、他們的歸巢到血管損傷部位的能力以及達到治療效果的有效數量等都是尚未充分了解的內容。

表面抗原（Lineage?surface?antigen）是當干細胞分化為各系的祖細胞和成熟細胞時，會出現各系的專一性標志，如淋巴系CD19/CD7/粒細胞系CD13、CD11、CD15、CD16,紅細胞系的CD47、CD51、CD71,巨核細胞系的CD31/CD41/CD42/CD61/CD63/CD107，T/NK系的CD2/CD25/CD7,這些在特定類型的血細胞表面出現的抗原通稱為系表面抗原，Lin抗原陽性就可以確定為祖細胞和成熟細胞，還有許多Lin抗原陰性的細胞稱之為原始干細胞，如CD34/CD133/SCA-1/CD38等等。我們可以根據各科室不同要求去除相關的成熟細胞系。