[發明專利]長柱十大功勞總生物堿的制備及其質量控制方法

有效

• 申請號: 201310223271.9
• 申請日: 2013-06-06
• 公開（公告）號: CN103301177A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 劉布鳴;邱宏聰;何開家;黃艷;孫翠;林霄;高微
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區中醫藥研究院
• 主分類號: A61K36/29
• 分類號: A61K36/29;A61P29/00;A61P1/12;A61P1/16;G01N30/90;G01N30/88
• 代理公司: 廣西南寧明智專利商標代理有限責任公司 45106
• 代理人: 馮菁

技術領域

本發明涉及總生物堿提取物制備領域，具體是一種長柱十大功勞總生物堿的制備及其質量控制方法。

背景技術

長柱十大功勞（Mahonia?duclouxiana?Gagnep.）是小檗科Berberidaceae十大功勞屬Mahonia植物的一個品種，資源十分豐富，其性味苦寒，入肝、胃、大腸經，具有清熱解毒化痰利濕的效用，主治肺結核、潮熱、咳嗽、咯血、腰膝無力、頭暈耳鳴、失眠；腸類腹瀉、黃膽型肝炎、目赤腫痛?，F代科學研究發現，十大功勞屬植物中富含原小檗堿類活性成分，何開家等從十大功勞中已分離得到5個化合物，分別鑒定為鹽酸藥根堿﹑鹽酸巴馬汀﹑鹽酸小檗堿﹑異粉防己堿和β-谷甾醇（【題名】長柱十大功勞化學成分研究【作者】何開家，劉布鳴，盧文杰,廣西中醫藥研究院【刊名】華西藥學雜志，2008,23(2):72-174），并經化學鑒別與薄層色譜鑒別，證明其生物堿成分主要有鹽酸藥根堿﹑鹽酸巴馬汀﹑鹽酸小檗堿（【題名】長柱十大功勞的鑒別【作者】劉偲翔，何開家，蔡全玲，等，廣西中醫藥研究院【刊名】廣西中醫學院學報，2008,11(1):48-49）。

長柱十大功勞在廣西資源豐富，然而，由于長期以來關于長柱十大功勞的研究較少，目前對長柱十大功勞的開發利用相對滯后，主要是直接用原藥材制備湯劑服用，這種傳統用藥方法有服用不方便、療效不穩定、質量無法控制等缺點。隨著藥品科技的發展，精制的天然植物提取物低毒高效的特性受到人們越來越多的青睞，現代科學研究亦發現長柱十大功勞提取物具有抗炎、鎮痛、止瀉、保護黃疸型肝炎等藥理作用，因此研發一種長柱十大功勞總生物堿提取物的制備及其質量控制方法是有必要的，利于開發長柱十大功勞新的藥用途徑，并為藥材資源的充分利用及提高其應用價值提供科學的依據。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種具有抗炎、鎮痛、止瀉、保護黃疸型肝炎等藥理作用的長柱十大功勞總生物堿的制備方法，以及長柱十大功勞總生物堿的質量控制方法。

本發明是這樣實現的：

本發明長柱十大功勞總生物堿的制備方法，包括以下步驟：

1、乙醇-鹽酸加熱回流提取：

①?取長柱十大功勞干燥莖干的粗粉，按重量配比加5-15倍量50%-90%體積濃度的乙醇-鹽酸（100：0.5）；?

②?在溫度為60-90?℃下回流提取1-4次，每次0.5-2.5小時，濾過，合并濾液；

③?濾液回收乙醇，并濃縮至無乙醇味，加水稀釋得到濃度為0.1-0.2?g生藥量/mL的長柱十大功勞提取液，待上柱用。

2、大孔吸附樹脂法分離純化：

①?選擇弱極性的AB－8或D101大孔吸附樹脂；

②?吸附：上柱長柱十大功勞提取液濃度為0.1-?0.2?g生藥量/mL，上柱長柱十大功勞提取液體積為填充大孔吸附樹脂體積的5-10倍，上樣流速1-3?BV/h【注：BV/h表示柱內單位時間（h）流經單位體積樹脂平均液量】；

③?洗脫：用10-50%乙醇為洗脫劑；洗脫劑用量為5-10?BV；洗脫流速為1-3?BV/h;?收集5-10倍洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，50-80?℃真空干燥，即可得到長柱十大功勞總生物堿提取物。

本發明長柱十大功勞總生物堿的質量控制方法，包括以下步驟：

1、總生物堿的薄層色譜鑒別：

取長柱十大功勞提取物粉末10?mg，置10?ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取長柱十大功勞藥材粉末1?g，加甲醇15?ml，超聲處理（功率160W，頻率40kHz）15分鐘，濾過，作為對照藥材溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，鹽酸藥根堿對照品，鹽酸巴馬汀對照品，加甲醇制成每1?ml含0.5?mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2?μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（體積比：6:3:1.5:1.5:0.5）為展開劑，置氨蒸汽飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置紫外燈（365?nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材，對照品相同的位置，顯相同顏色的斑點。

2、總生物堿的含量測定（一測多評測定法）

①?色譜條件與系統適用性試驗：?以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05?mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（體積比：3:7）（磷酸調pH值至3.0），為流動相；檢測波長為265?nm。