[發明專利]一株產聚羥基烷酸重組突變菌株

有效

• 申請號: 201310221457.0
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103275915A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 田杰生;王亞秋;錢欣欣;劉凌子;遲爽;黃金金;劉金鑫;李穎;李季倫
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P7/62;C12R1/19
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

1.一株大腸桿菌突變菌株Escherichia?coli?SM，經鑒定為大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），保藏日期為2013年4月28日，保藏編號為CGMCC?NO.7530。

2.一種產聚羥基烷酸重組突變菌株的構建方法，其特征在于，步驟如下：

（1）構建重組質粒pTZ18u-PHB：擴增克隆貪銅菌Cupriavidus?necator的phb合成操縱子，重組于質粒載體pTZ18u上；

（2）構建重組質粒pDP：擴增RK2質粒上的分配基因parDE，連接至步驟（1）得到的重組質粒pTZ18u-PHB上；

（3）構建重組突變菌株：將步驟（2）得到的重組質粒pDP，轉化進入權利要求1所述的大腸桿菌突變菌株Escherichia?coli?SM中。

3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述步驟（1）為提取貪銅菌基因組DNA，以之為模板，用正向引物：5’ATGGATCCCGGGCAAGTACCTTGCCGACATC3’和反向引物：5’GCCCGGATCCTATGCCCAACAAGGCACTAAG3’，PCR法擴增其phb操縱子。

4.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述步驟（2）將RK2質粒上的分配基因parDE片段克隆，插入一多拷貝質粒，構建成重組質粒pGW101，再將質粒pGW101上的parDE操縱子，用脫氧核糖核酸限制性內切酶BamHΙ和KpnΙ切下，連接至pTZ18u-PHB上，構建成重組質粒pDP。

5.根據權利要求2-4任意一項所述的構建方法構建得到的重組突變菌株。

6.利用權利要求5所述的重組突變菌株生產聚羥基烷酸的方法，其特征在于，該菌株在含有丙酸的培養基中，能夠隨培養基中磷酸鹽濃度的變化，而向聚合物中摻入不同量的3-HV單體，合成p(3HB-co-3HV)。

7.利用權利要求6所述的方法合成的聚羥基烷酸。

8.權利要求5所述的重組突變體菌株在生產聚羥基烷酸中的應用。