[發明專利]一種膠質瘤靶向磁共振和熒光雙模式成像對比劑及制備方法

有效

• 申請號: 201310220938.X
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103505746A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 趙彥兵;江凌宇;周慶;朱艷紅;楊祥良;劉衛
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: A61K49/14
• 分類號: A61K49/14;A61K49/12;A61K49/00
• 代理公司: 華中科技大學專利中心 42201
• 代理人: 夏惠忠

1.一種膠質瘤靶向磁共振和熒光雙模式成像對比劑，其特征在于，它是超順磁性共聚物納米凝膠和標記有熒光染料的乳鐵蛋白的共價鍵結合物。

2.根據權利要求1所述的對比劑，其特征在于，所述的超順磁性共聚物納米凝膠，是由丙烯酰胺類單體與帶有巰基或羧基或氨基的烯丙基類單體進行聚合反應形成共聚物納米凝膠，并在所述聚合反應過程中加入超順磁性鐵氧化物納米粒獲得的產物。

3.根據權利要求2所述的對比劑，其特征在于，所述丙烯酰胺類單體是N-異丙基丙烯酰胺、N-(2-羥丙基)丙烯酰胺、聚丙烯酰嗎啉、N-(3-羥丙基)-丙烯酰胺、聚乙二醇單甲醚甲基丙烯酸酯、2-甲基丙烯酰氧基-乙基磷酸膽堿、2-二甲氨基乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-二異丙氨基乙基甲基丙烯酸酯中的一種；優選N-異丙基丙烯酰胺、N-(2-羥丙基)丙烯酰胺或N-(3-羥丙基)-丙烯酰胺。

4.根據權利要求2所述的對比劑，其特征在于，所述的帶有巰基或羧基或氨基的烯丙基類單體是丙烯酸、丙烯胺、甲基丙烯酸、甲基丙烯胺、聚2-乙烯基吡啶、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯、磺胺嘧啶衍生物中的一種；優選丙烯酸、丙烯胺、甲基丙烯酸或甲基丙烯胺。

5.根據權利要求1所述的對比劑，其特征在于，所述的標記有熒光染料的乳鐵蛋白，是熒光染料與乳鐵蛋白通過共價鍵結合獲得的產物。

6.根據權利要求2所述的對比劑，其特征在于，所述的超順磁性鐵氧化物納米粒是粒徑為8-30nm的超順磁性三氧化二鐵納米粒或超順磁性四氧化三鐵納米粒；優選為10-20nm的超順磁性三氧化二鐵納米粒或超順磁性四氧化三鐵納米粒。

7.根據權利要求5所述的對比劑，其特征在于，所述熒光染料為Cy系列熒光染料、異硫氰酸熒光素、羰花青染料熒光染料DiR碘化物、羰花青染料熒光染料DiO高氯酸鹽中的一種，優選Cy系列熒光染料或羰花青染料熒光染料DiR碘化物。

8.根據權利要求7所述的對比劑，其特征在于，所述的Cy系列熒光染料是Cy3、Cy5、Cy5.5或Cy7，優選Cy5.5或Cy7。

9.一種膠質瘤靶向磁共振和熒光雙模式成像對比劑的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、制備超順磁性共聚物納米凝膠：取丙烯酰胺類單體、超順磁性氧化鐵納米粒、N，N’-亞甲基雙丙稀酰胺、十二烷基硫酸鈉溶于去離子水中，攪拌并通入氮氣，加入過硫酸鉀和帶有巰基或羧基或氨基的烯丙基類單體，在50-100℃反應4-8小時，將反應物用去離子水透析去除未反應單體，冷凍干燥獲得凍干粉，即為超順磁性共聚物納米凝膠，再用去離子水復溶，得到濃度為3％(質量/體積)的超順磁性共聚物納米凝膠溶液，其中，丙烯酰胺類單體與帶有巰基或羧基或氨基的烯丙基類單體的摩爾比為4∶1-40∶1，優選8∶1-20∶1。

步驟二、制備標記有熒光染料的乳鐵蛋白：取乳鐵蛋白溶于碳酸氫鈉水溶液中，向其中加入熒光染料溶液，混合均勻后避光振蕩，然后使用Sephadex^TM?G-50樹脂柱分離，獲得標記有熒光染料的乳鐵蛋白，其中，所用乳鐵蛋白的碳酸氫鈉溶液濃度范圍為0.05-50mg/mL，熒光染料溶液濃度范圍為1-50mg/mL，熒光染料與乳鐵蛋白摩爾比為0.3∶1-50∶1，優選2∶1-20∶1。

步驟三、制備活化的超順磁性共聚物納米凝膠：向步驟(1)獲得的濃度為3％(質量/體積)的超順磁性共聚物納米凝膠溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，振蕩后用磁鐵分離，并加入pH＝7.4、0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液分散，獲得濃度為3％(質量/體積)的活化的超順磁性共聚物納米凝膠，其中，帶有巰基或羧基或氨基的烯丙基類單體、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1∶1∶1。

步驟四、制備膠質瘤靶向磁共振和熒光雙模式成像對比劑：向步驟(3)獲得的活化的超順磁性共聚物納米凝膠中加入步驟(2)獲得的標記有熒光染料的乳鐵蛋白，室溫下反應過夜，用磁鐵分離，即得本發明膠質瘤靶向磁共振和熒光雙模式成像對比劑，其中，活化的超順磁性共聚物納米凝膠中鐵元素含量與標記有熒光染料的乳鐵蛋白中乳鐵蛋白含量的摩爾比為1∶0.01-1∶1，優選1∶0.1-1∶0.5。

10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于：

步驟一中所述的丙烯酰胺類單體是N-異丙基丙烯酰胺、N-(2-羥丙基)丙烯酰胺、聚丙烯酰嗎啉、N-(3-羥丙基)-丙烯酰胺、聚乙二醇單甲醚甲基丙烯酸酯、2-甲基丙烯酰氧基-乙基磷酸膽堿、2-二甲氨基乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯或2-二異丙氨基乙基甲基丙烯酸酯中的一種，優選N-異丙基丙烯酰胺、N-(2-羥丙基)丙烯酰胺、N-(3-羥丙基)-丙烯酰胺中的一種；

步驟一中所述的帶有巰基或羧基或氨基的烯丙基類單體為丙烯酸、丙烯胺、甲基丙烯酸、甲基丙烯胺、聚2-乙烯基吡啶、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯、磺胺嘧啶衍生物中的一種，優選丙烯酸、丙烯胺、甲基丙烯酸或甲基丙烯胺；

步驟二中所述的超順磁性鐵氧化物納米粒是粒徑為8-30nm的超順磁性三氧化二鐵納米粒或超順磁性四氧化三鐵納米粒，優選粒徑為10-20nm的超順磁性三氧化二鐵納米粒或超順磁性四氧化三鐵納米粒；

步驟二中所述的熒光染料為Cy系列熒光染料、異硫氰酸熒光素、羰花青染料熒光染料DiR碘化物、羰花青染料熒光染料DiO高氯酸鹽中的一種，優選Cy系列熒光染料或羰花青染料熒光染料DiR碘化物；所述的Cy系列熒光染料是Cy3、Cy5、Cy5.5或Cy7，優選Cy5.5、Cy7。