[發明專利]豬肉質性狀相關POSTN基因分子標記的克隆及應用

有效

• 申請號: 201310220869.2
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103333897A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 馬海明;許棟;王玲玉;賀長青;蔣雋;何俊;楊虎
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 江巨鰲

技術領域

本發明屬于家畜分子生物學技術領域，涉及一種包含如SEQ?ID?NO：1所示豬基因核苷酸的核酸分子。本發明還涉及如SEQ?ID?NO：1所示的多核苷酸序列中的單核苷酸多態性位點以及檢測所述單核苷酸多態性位點的方法。

背景技術

豬肉是我國城鄉居民動物性蛋白的主要來源，隨著人們對肉品需要量的增加，對肉質質量的要求也相對提高。而這主要是由基因控制，并存在主基因效應。分子生物技術的發展，使人們可以在DNA水平尋找控制肉質性狀的主基因或與其緊密連鎖的分子標記，在育種過程中應用于標記輔助選擇，以提高選擇進程，更好地改善豬肉質性狀，滿足人們的需要，以獲得更大的經濟效益。

肉質定義最為廣泛接受的是Hoffmarm的定義，即肉質應該考慮感官屬性、營養價值、技術質量和食品安全。感官屬性指外觀（如色澤）、保水力、硬度，食用品質指嫩度、多汁性、風味與滋味、臭味、大理石紋，營養價值指脂肪含量、脂肪酸組成、蛋白質含量、其它營養含量，技術因素指系水力、脂肪硬度、組織分離、氧化穩定性，社會質量指動物福利、環境，食品安全指微生物衛生（無沙門氏菌、彎曲桿菌）、無殘留(抗生素、重金屬、殺蟲劑)。影響豬肉質的因素很多，有遺傳因素和非遺傳因素，從遺傳上對豬肉質性狀進行評定和選育是改善豬肉品質的關鍵，肉質性狀大多屬于數量性狀，由微效多基因控制，某些數量性狀存在主基因效應，大多數屬于QTL。許多肉質性狀只能在動物屠宰后才能測定，所以常規選育只能寄予同胞或半同胞測驗，這就勢必加大選育成本，且遺傳進展緩慢。只能肉質性狀在動物屠宰時才能測定，需昂貴的同胞測驗，因此，利用分子標記進行輔助選擇(MAS)控制肉質性狀是非常有意義的。

分子生物技術的發展和豬高密度基因圖譜的構建，使育種工作者可在DNA水平上尋找影響肉質性狀的主基因或與其緊連鎖的分子標記，理論上這些主基因或分子標記一經確認，就可進行標記輔助選擇育種。

小鼠成骨細胞特異因子（periostin,osteoblast?specific?fctor,POSTN）基因POSTN被命名為Osf2，以小鼠的POSTN基因為探針，篩查人胚盤和骨肉瘤cDNA文庫，克隆2種人的POSTN基因不同形式，據推斷，一種編碼779個氨基酸，分子量為87.0KD，另外一種編碼836個氨基酸，分子量大小為93.3KD，POSTN蛋白含有1個典型的信號肽，1個半胱氨酸富集域和4個150個氨基酸的折疊重復結構，1個C-端結構域，小鼠和人POST?N蛋白的同源性是89.2%，成熟形式的同源性是90.10%。小鼠成骨細胞系的Northern印跡雜交檢測一個3.4kb的POSTN基因的轉錄本，RNA斑點雜交分析，POSTN基因在小鼠的成骨細胞和肺中表達，在其它器官中未測到表達。

Gillan等發現了一個含有POSTN基因的EST克隆，據推斷POSTN基因編碼782個氨基酸，RNA斑點印跡分析表明，該基因在成年人的主動脈、胃、胃腸道、胎盤、子宮、乳腺組織中廣泛表達。該基因在胎牛血清中表達，但在新生的犢牛血清中不表達。Gillan等發現，在培養的子宮瘤上分泌POSTN蛋白，但在正常的子宮上皮細胞中不分泌，從21個患有子宮癌病人中的20個人的腹水中發現POSTN蛋白。POSTN重組蛋白有助于子宮上皮細胞的粘附，而整合素ITGB3和ITGB5的抗體能抑制粘附，據此他認為OSTN是作為整合素IT-GB3和ITGB5的配體而促進細胞粘附和子宮上皮細胞的遷移。Shao等發現，POSTN在絕大多數人的乳腺腫瘤中過度表達，過度表達POSTN蛋白的轉染的腫瘤細胞系能加速生長，并且在無免疫應答動物的異種移植后，加速血管形成。POSTN介導的血液發生在某種程度上是由于血管內皮生長因子受體KDR的上調表達。

人POSTN基因DNA全長36096bp，cDNA全長為3213bp，含有23個外顯子，22個內含子，5'-UTR長為691bp，3'-UTR11bp。小鼠（Mus?musculus）DNA全長29908bp，cDNA全長為3187bp，含有22個外顯子，21個內含子，5'-UTR長為18bp，3'-UTR133bp。人該基因位于HSA13q13.3，小鼠POSTN基因位于3號染色體3C。

但是，目前國內外關于豬POSTN基因的相關研究很少。

發明內容

本發明的目的在于克隆豬肉質性狀基因POSTN片段，尋找POSTN基因的突變位點以及作為豬肉質性狀基因多態性的檢測方法，為標記輔助育種提供一種有用的分子標記。