[發明專利]一種宮頸異常細胞篩查試劑盒和酶標液基細胞保存液

有效

• 申請號: 201310219861.4
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103262838A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 沈玉先;王陽;方圣文
• 申請（專利權）人: 合肥安旸生物醫藥有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12Q1/42;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及制藥技術領域，具體涉及一種宮頸異常細胞篩查試劑盒和酶標液基細胞保存液。

背景技術

宮頸癌在女性惡性腫瘤占第二位，僅次于乳腺癌，全球大約每兩分鐘就有一位女性死于宮頸癌，全球每年估計有27萬女性死于宮頸癌，每年新發病例有50萬，其中大約有一半來自亞洲。

宮頸癌是早期發現可以成功治愈的癌癥之一。有大量證據表明早期發現宮頸癌并進行治療，女性完全可以獲得康復。因此，疾病的早期發現至關重要，同時也是一項極具意義的公共政策。世界衛生組織和所有發達國家及一些發展中國家的政府部門都在極力推進和鼓勵21-64歲的女性每年進行一次宮頸癌篩查，尤其對于性生活正常的女性，不管年齡大小，每年都需要進行此項檢查。

目前宮頸癌篩查方法的原理是基于對細胞形態學異常改變的觀察。遺憾的是，這項技術包括對這一技術的最新改進，步驟過于復雜、耗時長，都難以迎合進行大規模宮頸異常細胞的篩查的要求。為了滿足這一需要，我們開發了這種宮頸異常細胞的快速篩查方法。這項發明通過增強在傳統涂片上異常宮頸細胞的可視性，同時提高了傳統涂片法的敏感性和特異性。

同時，我們發明一種酶標液基細胞保存液，保存液用于臨床宮頸脫落細胞的保存。保存液包括醇類、穩定pH的緩沖液、維持離子強度和滲透壓的鹽類組成，在此保存液中，宮頸脫落細胞的酸性磷酸酶活性以及細胞形態得以保持，同時能夠除去樣本中的粘液、紅細胞和其他雜質，使液基制片更容易觀察。保存液有防腐、除去雜質、溶解紅細胞的功能。

說明書附圖

圖1臨床確診宮頸癌患者宮頸涂片染色示意圖，灰色箭頭所示為正常的宮頸鱗狀上皮細胞；黑色箭頭所示為典型的酸性磷酸酶陽性的宮頸鱗狀上皮細胞。

圖2A為健康對照宮頸涂片染色示意圖，酸性磷酸酶陰性。B為宮頸癌細胞系Hela細胞染色示意圖，箭頭所示紅色為酸性磷酸酶著色部位，C為細胞放大2倍后效果。

圖3A為FSC保存液中常溫保存4日的HeLa細胞染色結果；B為保存液A中常溫保存4日的HeLa細胞染色結果；C為Thinprep保存液中常溫保存4日的HeLa細胞染色結果。

發明內容

酸性磷酸酶是在男性前列腺高表達的一種酶，酸性磷酸酶檢測已被當作一個生物標志物，來診斷前列腺癌及檢測腫瘤有否向身體其他組織擴散，同時也被用來檢測治療效果。為了檢測女性宮頸組織是否也有酸性磷酸酶表達，我們發現在宮頸異常細胞中酸性磷酸酶高表達，而在正常宮頸細胞中則沒有表達。這項發現提示酸性磷酸酶是宮頸異常細胞篩查的一個非常實用的生物標志物。利用酸性磷酸酶這個生物標志物，開發出新的檢測試劑盒用于宮頸異常細胞的篩查。這種新方法應用細胞染色技術，利用傳統宮頸涂片來檢測酸性磷酸酶的表達來甄別宮頸異常細胞，其原理是利用萘酚AS-BI鹽或萘酚AS-MX鹽作為酸性磷酸酶底物，利用快紅紫、固醬紫或品紅等重氮鹽作為偶聯物在異常細胞內形成紅色沉淀。這種方法選擇性標記宮頸異常細胞，而正常細胞則不會著色。因此，標記上紅色的異常宮頸細胞與傳統染色相比結果更鮮明突出，顯著增加了異常細胞的可視性。

這種結果可讀性的增強減少了傳統涂片染色或新發展的液基細胞學檢查中結果讀取過程中的模糊性。我們的臨床實驗結果顯示新的方法可以提高20％以上的靈敏度，降低假陰性率達60％以上。而且，新方法在可讀性方面的提高適用于自動化，因而顯著增加宮頸異常細胞篩查中的高敏感性和特異性的輸出。新的檢測方法更快捷、花費更小，同時采用了常規可靠的染色方法，這種檢測方法在可以進行傳統涂片檢查的任何實驗室都可以進行。新方法結果可讀性的增加同時也顯著減少了樣本檢測所需要的時間，傳統涂片染色的操作可以由實驗室技術員或醫務人員進行，但結果則需要專業的病理學家來解讀。

具體實施例

實施例1：

一、FSC-811染色試劑盒成分：

(1)試劑A：固定液：10％福爾馬林

(2)試劑B：染色液：萘酚AS-BI磷酸鹽溶于二甲基甲酰胺配制成的溶液，其中萘酚AS-BI磷酸鹽終濃度為12.5g/l

(3)試劑C：鹽酸品紅：鹽酸品紅溶于2N?HCl配制成的溶液，其中鹽酸品紅的終濃度為4％(w/v)

(4)試劑D：亞硝酸鈉：0.5M?NaNO2

(5)試劑E：醋酸鈉溶液：2.5M，pH5.2

(6)試劑F：蘇木素復染液

(7)濾紙

二、染色步驟：

1.涂片在試劑A中固定1分鐘

2.用水充分洗凈