[發明專利]富集分離白色假絲酵母的新方法

無效

• 申請號: 201310219399.8
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103275879A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 許恒毅;熊勇華;魏華;賴衛華;黃小林
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12R1/725
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.富集分離白色假絲酵母的新方法，其特征在于包括以下步驟：(1)?稱取1?mg多臂井星聚合物，懸浮于4?mL0.01?mol/L?pH?8.0?PBS磷酸緩沖液中，攪拌滴加25%的戊二醛水溶液?545?μL，使戊二醛的終濃度為3%；在搖床150?r/min的轉速下室溫反應3.5?h；向上述溶液加入0.75?mg白色假絲酵母特異性抗體，以150?r/min?的轉速下室溫反應24?h；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結束將得到的溶液冷凍干燥得多臂井星聚合物-抗體復合物；（2）稱取15?mg?長鏈生物素，懸浮于4?mL?0.01?mol/L?pH?8.0?PBS磷酸緩沖液中，攪拌，滴加25%的戊二醛水溶液545?μL，使戊二醛的終濃度為3%，在搖床150?r/min的轉速下室溫反應3.5?h；加入2.65?mg多臂井星聚合物-抗體復合物，在搖床150?r/min的轉速下室溫反應24?h；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結束將得到的溶液冷凍干燥得長鏈生物素-多臂井星聚合物-抗體復合物；（3）取1?mL待測樣品溶液，加入0.1?mg白色假絲酵母抗體和長鏈生物素共修飾的多臂井星聚合物即步驟（2）長鏈生物素-多臂井星聚合物-抗體復合物，置于混勻儀上，以30?rpm的轉速室溫孵育15?min；加入0.1?mg修飾有鏈霉親和素的納米磁珠，置于混勻儀上，以30?rpm的轉速室溫孵育15?min，常規磁力架分離3?min；（4）磁力分離后，用0.1%PBST洗滌，用PBS緩沖液重懸即得捕獲有白色假絲酵母的納米磁珠-鏈霉親和素-長鏈生物素-多臂井星聚合物-抗體-白色假絲酵母抗原復合物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述多臂井星聚合物為多臂井星化聚酰胺-胺，其分子量為70000?Da。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述修飾了鏈霉親和素的納米磁珠粒徑為20-50?nm，優選為30?nm。