[發明專利]抗纖維介素蛋白的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201310219365.9
• 申請日: 2013-06-04
• 公開（公告）號: CN103435685A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 寧琴;羅小平;習東;王鳴;孫穎;王發席;嚴偉明
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K16/18;C12N5/20;A61K39/395;A61P35/00;C12R1/91
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 陶敏;王美蘭

技術領域

本發明涉及單克隆抗體，尤其涉及一種抗纖維介素蛋白的單克隆抗體以及分泌該抗纖維介素蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株，本發明還涉及該單克隆抗體在制備用于治療肝癌藥物中的應用。

背景技術

纖維介素蛋白2（Fibrinogen-like?protein2,fgl2）是近年來發現的一種促凝蛋白，又稱為fgl2凝血酶原酶，屬于纖維蛋白原相關蛋白超家族，最初在小鼠體內發現，隨后又從人的外周血T淋巴細胞克隆出其cDNA序列。小鼠纖維介素（mfgl2）的基因位于第5號染色體，其編碼蛋白由432個氨基酸組成；人纖維介素（fibroleukin,hfgl2）基因位于7q11,23，其基因序列分析提示fgl2基因全長約7kb，具有兩個外顯子，編碼蛋白由439個氨基酸組成，其中前204個氨基酸由外顯子1編碼。mfgl2和hfgl2基因編碼蛋白的氨基酸同源性大于70%，尤其羧基端225個氨基酸同源性超過90%。

Fgl2有兩種類型：跨膜型fgl2和分泌型fgl2（soluble?fgl2,sfgl2）。跨膜型fgl2是一種Ⅱ型跨膜糖蛋白，其分子量大小為70kDa，主要表達在血管內皮細胞和巨噬細胞的表面，是一種凝血酶原酶，能夠直接裂解凝血酶原成為凝血酶，從而快速啟動凝血反應（Levy?GA,Liu?MF,Ding?JW,et?al.Molecular?and?functional?analysis?ofhuman?prothrombinase?gene(hflg2)and?its?role?in?viral?hepatitis.Am?J?Pathol,2000,156:1217-1225），小鼠和人的病毒性肝炎的肝細胞損傷中均可以觀察到微血管中纖維蛋白的沉積和血栓形成；分泌型fgl2主要由T淋巴細胞分泌，其在免疫耐受方面發揮重要作用并且可導致自身免疫性疾病的發生。已有研究表明，fgl2與人、小鼠的病毒性肝炎、自發性流產以及移植排斥反應等均有密切關系（Parr?RL,Fung?LS,Reneker?J,et?al.Association?of?mouse?fibrinogen-like?protein?with?murine?hepatitisvirus-induced?prothrombinase?activity.J?Virol,1995,69(8):5003）。

腫瘤的發生和發展與凝血機制之間存在某種聯系早在1865年由法國學者Armand?Trousseau提出，促成這一關聯的主要因素包括凝血酶和組織因子（tissuefactor，TF），除了在腫瘤患者體內促進高凝狀態形成外，凝血酶被認為是腫瘤生長及轉移病理生理學改變的重要環節。凝血酶作為一個血管新生的有力催化劑，其作用主要是通過凝血非依賴途徑和凝血依賴途徑共同實現的。在凝血非依賴途徑中，凝血酶激活蛋白酶激活受體(protease?activated?receptors,PARS)，從而影響腫瘤細胞及其微環境中其他細胞的增殖和功能；在凝血依賴途徑中，凝血酶通過增加基質纖維蛋白的沉積，繼而影響腫瘤微環境中各種因素的平衡，尤其是血管新生相關的細胞和因子。

肝癌是發生于肝臟的惡性腫瘤，包括原發性肝癌和轉移性肝癌兩種，通常多指的是原發性肝癌，其是臨床上最常見的惡性腫瘤之一。根據最新統計，全世界每年新發肝癌患者約六十萬，在癌癥全球發病率中居第5位，死亡率居第3位。而我國乙肝患者眾多，肝癌發病人數約占全球的55%，是全球肝癌發病率最高的國家，已嚴重威脅我國人民的健康和生命，其危險性不容小視。目前針對肝癌的治療主要是早期采取手術切除，晚期采取局部治療輔以放療、全身化療等。由于在肝癌早期,多數患者沒有明顯的相關陽性體征，所以超過70%的肝癌患者發現時已喪失手術治療機會或者復發轉移，針對這些患者的傳統治療方法效果十分局限。

分子靶向治療是近年來發展起來的全新治療方法，它的基本概念是以腫瘤細胞過度表達的細胞受體、關鍵基因和某些標志性分子為靶點，選擇特異性阻斷劑靶向性地干預這些位點或其信號通路，從而達到抑制腫瘤生長、進展及轉移的效果。其中，單克隆抗體（monoclonal?antibody,mAb）具有明確的作用位點和親和力，并且特異性強、不良反應小，成為生命科學領域重要的分子靶向治療藥物，尋找針對腫瘤的特異性理想靶點成為全世界的科學研究熱點。基于前期的研究發現，在結腸癌、宮頸癌、乳腺癌、食管癌、肺癌、胃癌，肝癌等惡性腫瘤組織中均有較為廣泛的fgl2凝血酶原酶的表達，fgl2凝血酶原酶催化生成的凝血酶，與由組織因子觸發經典途徑所生成的凝血酶共同影響著惡性腫瘤的生物學行為，成為抗腫瘤治療的良好靶點。

發明內容