[發明專利]測量氨基酸?N?甲酸酐中氯離子含量的方法

有效

• 申請號: 201310219049.1
• 申請日: 2013-06-04
• 公開（公告）號: CN103335873B
• 公開（公告）日: 2017-04-19
• 發明（設計）人: 李國弢;唐洋明;韋暢勇;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N33/00
• 代理公司: 北京萬慧達知識產權代理有限公司11111
• 代理人: 段家榮,段曉玲

技術領域

本發明涉及制備可用于測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，以及測量N-羧基酸酐中氯離子含量的方法。本發明還涉及制備具有高純度N-羧基酸酐的方法，以及制備得到的具有高純度N-羧基酸酐。此外，本發明還涉及制備具有高純度多肽混合物的方法，以及由此制備得到的多肽混合物，尤其地，多肽混合物是醋酸格拉替雷。

背景技術

氨基酸N-羧基酸酐（即，下文中表示為“N-羧基酸酐”或“氨基酸NCA”）是3-取代噁唑啉-2,5-二酮，如下所示：

由于從α-、β-、γ-氨基酸中得到的N-羧基酸酐（縮寫為NCA）的酸性功能基團的活化可使得其成為具有反應性的化合物。這是因為N-羧基酸酐使得該酸性功能性基團與任何親核本體的反應成為可能。因此，使得通過與胺功能基團反應進行酰胺功能基團制備得到簡化。由此，N-羧基酸酐通常用于合成多肽。此外，N-羧基酸酐與醇反應液容易形成酯鍵。

有幾個已知方法可用于制備N-羧基酸酐，例如US6656458，US4267344和US6479665。最普通和最直接的方法是將氨基酸或其鹽酸鹽與光氣、雙光氣或三光氣在溶劑介質中反應。

與光氣的反應如下圖所示：

其中，R表示α-、β-、γ-氨基酸的主要游離基，R’表示氫原子或氨基酸的仲氨基的游離基，R’可以與R形成環。

已知，在合成N-羧基酸酐過程中除了N-羧基酸酐外，還形成了大量鹽酸氣，也就是說每摩爾的N-羧基酸酐生產2mol鹽酸氣。鹽酸氣是具有高反應性的，在介質中，鹽酸氣的存在將可能導致副反應和氯化副產物的出現。從質量和產量方面，殘留在N-羧基酸酐中的氯化雜質是絕對不希望的。由于殘留在N-羧基酸酐中鹽酸氣的存在，會嚴重干擾N-羧基酸酐的聚合反應。為了聚合能順利進行，需要在N-羧基酸酐單體中存在的氯離子含量足夠低。因此，可游離氯的含量通常需要小于0.05wt%。

很多類型的多肽混合物，例如醋酸格拉替雷，是通過氨基酸的N-羧基酸酐進行聚合而制備得到。例如，醋酸格拉替雷(GA，也稱為共聚物-1，Cop-1或，CAS No.147245-92-9)，它通過四種氨基酸（L-丙氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸-γ-芐酯、L-ε-三氟乙酰基-賴氨酸）的N-羧基酸酐（NCA）進行隨機聚合而制備的多肽混合物，具有如下結構式：

(Glu,Ala,Lys,Tyr)_xXCH₃COOH

(C₅H₉NO₄·C₃H₇MO₂·C₆H₁₄N₂0₂·C₉H₁₁NO₃)x'XC₂H₄O₂

醋酸格拉替雷是一種用于治療多發性硬化癥的人工合成多肽混合物（M.M.Mouradain,Pharmacology&Therapeutics,98,245-255,2003）。具體請參見physician′s Desk Reference,Thomson PDR,Montvale,New Jersey,第3297頁(2007)。醋酸格拉替雷的氨基酸摩爾比大約是0.392-0.462:0.129-0.153:0.300-0.374:0.086-0.100，平均分子量大約5000-9000道爾頓。

本發明發明人發現，由N-羧基酸酐制備多肽混合物（如，醋酸格拉替雷）時，N-羧基酸酐的品質，尤其是游離氯離子含量，對于聚合反應和產物的品質影響很大。特別地，如果N-羧基酸酐不能達到應有規格，醋酸格拉替雷的平均分子量和氨基酸組成都會達不到應有的范圍：醋酸格拉替雷的氨基酸摩爾比大約是0.392-0.462:0.129-0.153:0.300-0.374:0.086-0.100，平均分子量大約5000-9000道爾頓。

為了使制備的多肽混合物（如，醋酸格拉替雷）可以達到產品相應的要求，本發明發明人發現，N-羧基酸酐優選純度≥99.5%，氯離子<0.01%，游離氨基酸含量<0.01%。