[發明專利]克雷伯氏菌劑生物降解果蔬與土壤表面殘留的毒死蜱農藥

無效

• 申請號: 201310218540.2
• 申請日: 2013-06-04
• 公開（公告）號: CN103484393A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 徐恒;李創;唐敦義
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N25/32;B09C1/10;C12R1/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于微生物環境修復技術領域，具體涉及到克雷伯氏dsp-B菌株及其對土壤和果蔬表面毒死蜱農藥殘留的生物降解方法。?

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背景技術

農藥是現代化農業必不可少的生產資料,?其在減少農作物病蟲害,?增加農產品產量,?提升農產品質量等方面發揮了巨大的作用,?從而提高了農業生產效率。我國是一個農業大國,?農藥的生產量及使用量巨大。農藥生產方面,?近年來我國農藥產量呈連續快速增長的態勢。國家統計局數據顯示2011年全國農藥產量已達264.?8萬噸。農藥使用方面,?農業部全國農技推廣中心估計2012年全國農藥商品需求總量達98.?4萬噸。同時,?我國是蔬菜生產大國。統計資料顯示,?截至2009年我國蔬菜播種面積為0.?273億公頃,?總產量達6.?02億噸,?分別占世界的43%和49%,?均居世界第一。由于蔬菜生長周期短,?且病蟲害較多,?因此每年需要消耗大量農藥用于防治蔬菜的病蟲害。我國是農藥生產使用大國和蔬菜生產大國的國情決定了由農藥在蔬菜生產中的大量使用所帶來的農藥殘留問題將持續存在。蔬菜農藥殘留超標可造成社會經濟損失。近年來我國出口的蔬菜因達不到進口國衛生技術標準的要求而被拒絕進口的事件時有發生,?不僅影響我國蔬菜的出口,?而且直接制約了我國農產品在國際市場上的競爭力。因此蔬菜農藥殘留問題必須引起足夠重視。農藥殘留的方法：物理方法處理果蔬農藥殘留是一般常用的方法，但水洗或洗滌劑洗滌的效果和應用范圍終究有限。近些年來發展起來的化學處理果蔬農藥殘留的方法不失為一種較好的替代方法。有報道指出，次氯酸鹽處理農藥殘留可能會導致生成一些粘在果蔬表面的有毒或致癌的有機氯化合物，因此使用受到一定的限制。農藥殘留及其廢水的降解主要有微生物降解、化學降解和光降解等方式。微生物能夠通過各種生物化學作用將壞境中的有機污染物轉化為CO₂和H₂O等無毒或毒性較小的物質。與物理、化學降解方式相比，微生物降解具有操作簡單、降解徹底、無二次污染等優點。因此利用微生物技術處理農藥殘留，并對受污染的土壤與水體進行生物修復是一種行之有效的方法。毒死蜱是甲胺磷和甲基對硫磷等高效農藥的新型高效、低毒替代品種,作為一種廣譜型有機磷酸酯類殺蟲劑,被廣泛用于農業和城市衛生害蟲的防治。由于其大量頻繁使用和它的持久性，在水體、土壤、和植物等環境樣品中大量檢出毒死蜱殘留。毒死蜱屬中度毒性殺蟲劑，能抑制人體膽堿酯酶活性，蓄積于神經系統后導致惡心、頭暈、甚至神志不清，高濃度暴露可造成呼吸麻痹和死亡。因此，尋找一種去除環境中毒死蜱農藥殘留高效安全的方法成為關注的焦點，而利用毒死蜱高效降解菌劑應用于其污染環境的治理具有重要的現實意義和應用前景。?

發明內容本發明的目的是針對農業生產中殘留于蔬菜及土壤表面的毒死蜱農藥,采用生物降解法處理。以及該生物降解-油包水菌劑的制作工藝與使用方法，本菌劑產品可以使毒死蜱殘留量降低88%左右，且生產工藝簡單,成本低廉,具有廣闊的市場前景。?

技術方案

本發明分離純化了一種毒死蜱降解菌，該菌株為革蘭氏染色陰性的克雷伯氏菌屬（Klebsiella?sp.），該菌株16SrDNA的Genbank登錄號為HQ836365。該菌株拉丁文名稱：Klebsiella?sp.?dsp-B保藏日期：2012年11月23日。保藏地址：湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心即中國典型物保藏中心。菌種保藏編號：M2012477。該菌電鏡照片如附圖一所示：大小1-2um,橢圓形或長方形。該菌能利用毒死蜱為唯一碳源和能源進行生長，將其徹底礦化為二氧化碳和水及簡單的無機化合物。在實驗室條件搖瓶試驗中，菌劑對實地降解毒死蜱最高降解率達81.6%。該菌的最適生長pH為6.8-7.2，最適生長溫度為32℃。工藝流程：保藏純化菌種→搖瓶培養→種子罐擴大培養→發酵罐再擴大→分裝產品。本發明的詳細實施步驟為：

（1）??????????將保藏的純化菌種-克雷伯氏菌接種于LB培養基搖瓶中，振蕩8h培養至對數生長期；

（2）??????????將上述培養好的菌液按15%體積接種量轉入種子罐，繼續培養至對數生長期；

（3）??????????將達到對數生長期的種子液按15%的接種量接入發酵罐中培養；