[發(fā)明專利]融合構(gòu)建體及其用來(lái)生產(chǎn)Fc受體結(jié)合親和性和效應(yīng)子功能提高的抗體的用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310218123.8
• 申請(qǐng)日: 2004-01-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103540600B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: P·烏馬納;P.布林克;C·費(fèi)拉拉;T·蘇特爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 羅氏格黎卡特股份公司
• 主分類號(hào): C12N15/52
• 分類號(hào): C12N15/52;C12N15/54;C12N15/56;C12N15/63
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所11038
• 代理人: 李英

1.編碼融合多肽序列的分離的核酸，其中所述的融合多肽具有β(1,4)-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶(Gal T)活性，

其中所述融合多肽由Gal T的催化結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物甘露糖苷酶II(Man II)的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，

其中Gal T的催化結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：22的氨基酸序列構(gòu)成，且

其中Man II的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：23的氨基酸序列構(gòu)成。

2.編碼融合多肽序列的分離的核酸，其中所述融合多肽具有β(1,4)-N-乙酰氨基葡糖轉(zhuǎn)移酶III(GnT III)活性，其中所述的融合多肽由GnT III的催化結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物β(1,2)-N-乙酰氨基葡糖轉(zhuǎn)移酶I(GnT I)的高爾基定位結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中GnT III的催化結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：21的氨基酸序列構(gòu)成，且其中GnT I的高爾基定位結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：24的氨基酸序列構(gòu)成。

3.編碼融合多肽序列的分離的核酸，其中所述的融合多肽具有Gal T活性，其中所述的融合多肽由Gal T的催化結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物GnT I的高爾基定位結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中的Gal T催化結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：22的氨基酸序列構(gòu)成，且其中的GnT I高爾基定位結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：24的氨基酸序列構(gòu)成。

4.表達(dá)載體，含有根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)中的分離的核酸。

5.融合多肽，由權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的分離的核苷酸所編碼。

6.含有權(quán)利要求4的表達(dá)載體的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞。

7.生產(chǎn)具有GnT III活性或Gal T活性的融合多肽的方法，包括在允許表達(dá)編碼所述融合多肽的所述核酸的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求6的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，并從所得培養(yǎng)物中收集所述融合多肽。

8.修飾哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽的糖基化形式的方法，包括將權(quán)利要求1-3任一的核酸導(dǎo)入所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中。

9.修飾哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽的糖基化形式的方法，包括將權(quán)利要求4的表達(dá)載體導(dǎo)入所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中所述多肽選自IgG、IgG1、和包括等價(jià)于人IgG Fc區(qū)的區(qū)域的融合蛋白。

11.哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，該哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞被工程化以表達(dá)至少一種編碼具有Gal T活性的融合多肽的核酸，其表達(dá)量足以修飾所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽的Fc區(qū)中的寡糖，其中所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽是整個(gè)抗體分子或融合蛋白，該融合蛋白包括等價(jià)于免疫球蛋白Fc區(qū)的區(qū)域，

所述融合多肽具有Gal T活性，其由Gal T的催化結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物Man II的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中Gal T的催化結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：22的氨基酸序列構(gòu)成，且其中Man II的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：23的氨基酸序列構(gòu)成。

12.哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，該哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞被工程化以表達(dá)至少一種編碼具有GnT III活性的融合多肽的核酸，其表達(dá)量足以修飾所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽的Fc區(qū)中的寡糖，其中所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽是整個(gè)抗體分子或融合蛋白，該融合蛋白包括等價(jià)于免疫球蛋白Fc區(qū)的區(qū)域，

所述融合多肽具有GnT III活性，其由GnT III的催化結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物GnT I的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中GnT III的催化結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：21的氨基酸序列構(gòu)成，且其中GnT I的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：24的氨基酸序列構(gòu)成。

13.哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，該哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞被工程化以表達(dá)至少一種編碼具有Gal T活性的融合多肽的核酸，其表達(dá)量足以修飾所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽的Fc區(qū)中的寡糖，其中所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的多肽是整個(gè)抗體分子或融合蛋白，該融合蛋白包括等價(jià)于免疫球蛋白Fc區(qū)的區(qū)域，

所述融合多肽具有Gal T活性，其由Gal T的催化結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物GnT I的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中Gal T的催化結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：22的氨基酸序列構(gòu)成，且其中GnT I的高爾基體定位結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO：24的氨基酸序列構(gòu)成。