[發明專利]一種測定養血清腦有效成分的方法

有效

• 申請號: 201310217700.1
• 申請日: 2013-06-03
• 公開（公告）號: CN104215701B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 王相陽;馬曉慧;李偉;褚揚;郭嘉華;李淑明;周水平;朱永宏
• 申請（專利權）人: 天士力制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙)11130
• 代理人: 王為

技術領域

本發明涉及一種藥物檢測方法，特別涉及一種測定養血清腦有效成分的方法。?

背景技術

養血清腦顆粒是天士力集團根據中醫藥傳統理論,采用最新的工藝獨家研制生產的現代中藥,1999年獲國家新藥發明專利,對慢性腦供血不足(CCCI)及其他原因引起的頭暈、頭痛、失眠、健忘等有顯著療效，現已成為天士力集團的重點產品。養血清腦顆粒的配方描述在一種治療頭痛的中藥、專利號為931000505的發明專利中，其組成包括，當歸4-9%，川穹4-9%，白芍2-8%，熟地2-8%，勾藤10一15%，雞血藤10-15%，夏枯草10一15%，決明子10一15%，珍珠母10-15%，元胡4-9%，細辛0.5-2%。養血清腦顆粒已經列入國家藥品標準，標準號為WS3-258(Z一036)-2001(Z)。?

上述配方，根據臨床需要也可以制備成片劑，膠囊，口服液等劑型，療效相同。由于中藥物質基礎復雜，之前并沒有人進行過養血清腦中主要化學成分的藥動學實驗，因此需要開發一個特異性好、靈敏度高、定量準確的含量測定方法來測定血漿中有效物質的含量。本實驗采用液質聯用儀器，建立了一種能夠同時測定養血清腦中6種有效成分原兒茶酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、芍藥苷的血藥濃度測定方法，而且該方法專屬性好、靈敏度高、精密度、準確度、提取回收率和穩定性等均達到體內藥物分析的要求，之后又利用該方法對6種有效成分在大鼠體內的藥動學特征進行了考察。?

發明內容

本發明提供一種測定養血清腦有效成分的方法，該方法可用于服藥后有效成分的血藥濃度的測定，有利于對服用該藥物后進行有效成分的吸收利用相關的藥物測定。?

本發明所述方法是針對養血清腦制劑的，所述制劑包括養血清腦顆粒，也包括用上述配方制備的養血清腦片劑，膠囊，口服液等劑型。養血清腦制劑中包括多種?有效成分，目前已知的有效成分包括原兒茶酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、芍藥苷等，本發明根據臨床需要，研究出一種同時測定血漿中上述6種有效成分的方法，本發明所述方法，采用液質聯用法，所述方法的詳細描述如下：?

（1）樣品處理：取血漿樣品（給包括人在內的動物服用養血清腦制劑，一定時間后，取血，分離得到血漿）1-3體積，加入0.2-2體積酸溶液和0.2-1體積內標溶液（配制方法如下：精密稱定氯霉素1.0mg置于10Ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得儲備液，取儲備液適量并用甲醇稀釋至所需濃度），渦旋混合；之后加入10-50體積有機溶劑渦旋混合進行液液萃取；上述混合液離心后取有機溶劑層，吹干，然后用1-2體積液相流動相復溶后離心，取上清液進樣測定，其中流動相含50%-90%A相，其余為B相；?

（2）采用液質聯用儀進行測定：?

其中液相部分色譜條件：采用反相c18或c8硅膠色譜柱作為分離介質，進樣后梯度洗脫，其中，流動相A0.02-5%(甲酸或乙酸)水，B乙腈或甲醇；梯度洗脫條件：0-2.5min(10%B、90%A)；2.51-5min(100%B)；5.1-20min(10%B、90%A)；流速；0.1-0.4ml/min；柱溫15-40℃；?

質譜檢測條件：負離子檢測模式；噴霧電壓：-2500—-3500v；毛細管溫度：250-400℃；鞘氣：N2（5-25psi）；輔助氣：N2（1-15arb）；碰撞氣體壓力：Ar1.5mTorr；掃描時間：0.1-1s；?

采用選擇反應監測模式（SRM）：?

原兒茶酸離子對m/z153→109或153→91CE=10-30v;?

綠原酸m/z353→191或353→85CE=10-40v;?

咖啡酸m/z179→135或179→108CE=10-45v；?

阿魏酸m/z193→134或193→178CE=5-30v；?

迷迭香酸m/z359→161或359→197或133CE=10-50V；?

芍藥苷m/z525→449或525→121CE=10-30V；?

氯霉素m/z321→152CE=10-40V。?

以上檢測方法，其中，步驟1中所述的酸溶液選自，鹽酸，0.1-10%的甲酸或0.01-0.2%的磷酸。優選1%的甲酸或0.05%的磷酸。步驟1中所述的內標溶液是：?

丹參素、酮洛芬、氯霉素、弗比洛芬中的一種。?

步驟2中所述的有機溶劑為：乙酸乙酯，二氯甲烷或3：1體積比的三氯甲烷與正己烷的混合溶劑。?