[發明專利]一種結核桿菌三抗原融合基因疫苗及其制備方法和應用有效

申請號：	201310217256.3	申請日：	2013-06-03
公開（公告）號：	CN103266119A	公開（公告）日：	2013-08-28
發明（設計）人：	熊思東;徐薇;董春升;岳艷;孔紅梅	申請（專利權）人：	蘇州大學
主分類號：	C12N15/62	分類號：	C12N15/62;C07K19/00;C12N15/66;A61K48/00;A61P31/06
代理公司：	上海世貿專利代理有限責任公司 31128	代理人：	嚴新德
地址：	215006***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種結核桿菌抗原融合基因疫苗及其制備方法應用
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【權利要求書】：

1.一種融合蛋白基因，其特征在于：由抗原基因Rv3615c、抗原基因Mtb10.4和抗原基因Rv2660c從5’端到3’端依次串聯連接而成。

2.如權利要求1所述的一種融合蛋白基因，其特征在于：在所述的抗原基因Rv2660c的3’端連接一個Flag標簽。

3.如權利要求2所述的一種融合蛋白基因，其特征在于：所述的Flag標簽的基因序列為DYKDDDDK。

4.如權利要求1所述的一種融合蛋白基因，其特征在于：所述的融合基因的堿基序列如SEQ?ID?NO：7所示。

5.一種權利要求1所述的融合蛋白基因編碼的蛋白質。

6.如權利要求5所述的一種蛋白質，其特征在于：所述的蛋白質的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：8所示。

7.如權利要求1所述的一種融合蛋白基因，其特征在于：所述的抗原Rv3615c的基因序列如SEQ?ID?NO：1所示。

8.如權利要求1所述的一種融合蛋白基因，其特征在于：所述的抗原Mtb10.4的基因序列如SEQ?ID?NO：2所示。

9.如權利要求1所述的一種融合蛋白基因，其特征在于：所述的抗原Rv2660c的基因序列如SEQ?ID?NO：3所示。

10.一種結核桿菌三抗原融合基因疫苗，由一個載體構成，在所述的載體中插入有一段外源融合目的基因，其特征在于：所述的外源目的基因為權利要求1所述的融合蛋白基因。

11.如權利要求10所述的一種結核桿菌三抗原融合基因疫苗，其特征在于：所述的載體為真核表達質粒。

12.權利要求10所述的結核桿菌三抗原融合基因疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)提取結核分枝桿菌H37Rv株基因組DNA作為模板，通過PCR方法擴增蛋白抗原Rv3615c片段，Mtb10.4片段和Rv2660c片段的編碼基因；

所述抗原Rv3615c片段的雙鏈DNA的序列為：

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tactgccttt?tgaactggca?ggtcgggctc?gcagagccac?atgaccgcag?cgtggtactg

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所述抗原Mtb10.4片段的雙鏈DNA的序列為

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所述抗原Rv2660c片段的雙鏈DNA的序列為：

gtgatagcgg?gcgtcgacca?ggcgcttgca?gcaacaggcc?aggctagcca?gcgggcggca

cactatcgcc?cgcagctggt?ccgcgaacgt?cgttgtccgg?tccgatcggt?cgcccgccgt

ggcgcatctg?gtggggtcac?cgtcggtgtc?ggcgtgggca?cggaacagag?gaacctttcg

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2)以上述擴增的抗原Rv3615c，Mtb10.4和Rv2660c片段作為模板，通過另外設計的三對引物，經OverPCR的方法擴增抗原Rv3615c，Mtb10.4和Rv2660c片段，獲得的三抗原融合蛋白基因，所述三抗原融合基因的雙鏈DNA的序列為：