[發明專利]合成型轉錄因子VP64?linker?Os03g11370在改良水稻籽粒性狀方面的應用

有效

• 申請號: 201310214040.1
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN104211809B
• 公開（公告）日: 2017-02-08
• 發明（設計）人: 李宏宇;張春雨;劉斌;趙濤;劉軍;林辰濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王朋飛

技術領域

本發明屬于遺傳工程領域，涉及水稻轉錄因子Os03g11370基因的應用，具體地，涉及合成型轉錄因子VP64-linker-Os03g11370在改良水稻籽粒性狀方面的應用。?

背景技術

水稻(Or_yza?sativa?L.)是我國和全世界重要的糧食作物，世界1/2以上人口以水稻為主食，因此水稻產量性狀一直以來倍受科學家們的關注，而水稻籽粒大小則是影響產量的主要因素之一。另外，水稻作為農作物基因功能研究的模式植物，與其相關的遺傳學和分子生物學研究一直受到研究者們的重視。水稻籽粒的生長發育是一個有次序的、選擇性的基因表達過程，轉錄因子在其基因表達的精確調控中起到了關鍵性的作用。?

近些年，有關籽粒大小性狀的分子遺傳調控機制研究，已取得了一定進展，如：研究者們利用QTL定位了一些籽粒大小相關基因，其中GS3編碼一個膜蛋白，是籽粒大小和器官大小的負調控因子；張啟發等研究發現GS5編碼一個調節籽粒大小的絲氨酸羧肽酶，是控制籽粒大小的正調節因子，過表達GS5可使水稻籽粒明顯變大；轉錄因子在調控籽粒大小方面起著非常重要的作用，OsWRKY78可以調節水稻莖的伸長和種子的發育，OsWRKY78突變體可以使莖桿變矮化影響籽粒發育；螺旋-環-螺旋蛋白(bHLH)類轉錄因子能通過調控外稃和內稃細胞的長度影響谷粒的大小；PGL1堿性螺旋-環-螺旋蛋白(bHLH）異源二聚體作為結合DNA的bHLH的抑制子過表達后可增加籽粒長度和重量。?

VP16最早在動物病毒基因中發現，現已被廣泛應用到植物中，?主要用于植物基因的轉錄調控的研究中。轉錄因子在體內的作用大體上可以分成兩種：一種為轉錄增強子，另一種為轉錄抑制子。當轉錄因子和VP16功能域基序融合之后，它就會增強轉錄因子的功能，從而在轉基因植株中出現更明顯的表型變化。?

發明內容

本發明的目的在于提供水稻轉錄因子Os03g11370基因的應用。?

為了實現本發明目的，本發明提供了一種融合蛋白（VP16）_4-linker-Os03g11370，其中，linker由39個柔性氨基酸串聯而成；VP16為來自單純皰疹病毒（Herpes?simplex?virus）的VP16蛋白；Os03g11370為水稻轉錄因子Os03g11370。?

優選地，所述融合蛋白（VP16）₄-linker-Os03g11370為：?

（1）SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；?

（2）SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列經取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有同等功能的由（1）衍生的蛋白質。?

本發明還提供了所述融合蛋白（VP16）₄-linker-Os03g11370的編碼基因，優選地，所述基因為VP64-linker-Os03g11370。?

所述基因VP64-linker-Os03g11370的核苷酸序列為：?

（1）SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列；?

（2）在嚴格條件下，能夠與（1）所示核苷酸序列雜交的核苷酸序列；其中，所述嚴格條件為65℃，在0.1×SSPE或0.1×SSC、0.1%SDS的溶液中雜交并洗膜。?

其中，所述Os03g11370的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.4所示；所述linker（連接子）的核苷酸序列如SEQ?IDNo.5所示，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.6所示;所述VP64（4×VP16）的核苷酸序列如SEQ?IDNo.7所示，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.8所示，其氨基酸序列中，Asp?Ala?Leu?Asp?Asp?Phe?Asp?Leu?Asp?Met?Leu代表VP16序列，Gly?Ser為連接VP16的間隔序列。?