[發明專利]針對HPV16E7基因的小干擾RNA及其應用

無效

• 申請號: 201310213420.3
• 申請日: 2011-09-27
• 公開（公告）號: CN103333892A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 湯濤;東碩;曹宇;李珺;萬力;畢宏偉
• 申請（專利權）人: 天津佰思普生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本申請是申請日為2011年9月27日、申請號為201110288582.4、發明名稱為“針對HPV16E7基因的小干擾RNA及其應用”的發明專利申請的分案申請。?

技術領域

本發明涉及雙鏈核糖核酸(dsRNA)，并涉及其通過RNA干擾(RNAi)作用來預防及治療人乳頭瘤病毒16亞型(HPV16)感染所引起的相關疾病的用途，其中所述疾病例如宮頸癌、外陰癌、食管癌、乳腺癌、肺癌等癌癥，以及由HPV16所引起的癌前病變和生殖器疣等疾病。?

背景技術

1998年，Andrew?Z.Fire和Craig?C.Mello共同發現了體內RNA干擾的作用機制，并于2006年共同獲得了諾貝爾生理醫學獎。從而為抵抗病毒、癌癥等嚴重疾病的新一代藥物(RNA干擾類藥物)的研發開啟了一扇大門。此RNA干擾類藥物具有作用方式新穎、作用機制明確、靶向性強和副作用小等優點。?

人類乳突病毒(Human?Papillomavirus，簡稱HPV)，屬于乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬，是一種小型無包膜的病毒顆粒，呈球形，二十面體對稱，直徑約45-55nm，病毒的核心為雙鏈DNA；病毒衣殼由兩種結構蛋白構成的72個殼微粒組成。病毒DNA包含約8000堿基對，其中包括8個早期開放讀碼框架(E1-E8)、2個晚期讀碼框架(L1和L2)和1個非編碼長控區(LCR)。在早期開放讀碼框架中，E6和E7基因對細胞生長刺激最為重要，單獨E7編碼的E7蛋白就可以引起宮頸上皮細胞永生化。而晚期讀碼框L1和L2基因分別編碼HPV的主要和次要衣殼蛋白，組裝成HPV的衣殼。?

HPV是世界上最流行的性傳染疾病源之一，同時也是一類重要的人類腫瘤病毒。目前已經鑒定超過100種HPV病毒的亞型。HPV各型之間有共同抗原，存在于L1蛋白保守區域，這些抗原具有屬特異。依其感染的上皮所在部位：分為皮膚上皮型HPV和粘膜上皮型HPV。?

最早確定以及最重要的HPV相關腫瘤是宮頸癌，其發病率僅次于乳腺癌，是嚴重威脅女性健康的殺手。據統計每年世界范圍內約有490,000例左右的新發?病例，其中約130,000發生在中國，每年約有270,000人死于該疾病，約50,000是中國人。隨后，更發現外陰癌、食管癌、乳腺癌甚至肺癌等惡性腫瘤的發生、發展都與HPV感染相關。迄今發現的100多種HPV亞型中，高致癌的HPV亞型(即高危型HPV)有10多種，包括HPV16、18、31、58等。目前認為，HPV感染對宮頸癌的發生是必要但非充分的。據研究顯示，99.7％宮頸癌患者存在HPV感染。?

已感染HPV的女性初期癥狀不明顯。通過基于對異常宮頸細胞組織學評估的Pap測試以及基于核酸的PCR及雜交技術可以確定HPV的存在并確定HPV亞型。異常宮頸細胞分級為低度鱗狀上皮內病變(LSIL)和高度鱗狀上皮內病變(HSIL)。其中LSIL包括宮頸上皮內瘤變一級(CIN?I)的細胞；HSIL包括宮頸上皮內瘤變二級(CIN?II)和三級(CIN?III)的細胞。?

目前用于治療HPV感染的藥物及療法主要有：1、鬼臼樹脂(podophyllin)；2、鬼臼毒素podophyllotoxin(podofilox)；3、三氯乙酸(TCA)/二氯乙酸(BCA)；4、冷凍療法；5、手術切除；6、干擾素(IFN)；7、咪喹莫特hniquimod[1-(2-methylpropyl)-1H-imidazo(4，5-quinolin-4-amine)]；8、5-氟尿嘧啶/腎上腺素；9、無環核苷酸類似物Cidofovir(HPMPC：[5]-1-[3-hydroxy-2-phosphonylmethoxy-propyl]-cytosine)等等。然而，臨床上應用的這些抗病毒以及其它抗腫瘤類藥物的不但特異性不強，而且副作用大。目前世界上沒有一種特異、高效的抑制HPV的藥物來降低甚至抑制其相關癌癥的發生和發展。?

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了通過小干擾核酸分子抑制引起細胞良性和惡性增生的HPV?E7基因表達，來預防和治療HPV16感染相關疾病的解決方案。?