[發明專利]一種利用組織培養技術快速繁殖暗紫貝母的方法

有效

• 申請號: 201310211080.0
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN103283600A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 陳勇明
• 申請（專利權）人: 常熟市佳盛農業科技發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 徐萍

技術領域

本發明涉及一種貝母的組織培養方法，尤其涉及一種適用于暗紫貝母的快速繁殖方法。

背景技術

暗紫貝母(F.?unibiacteata?Hsiao?et?K.?C.?Hsia)?是貝母屬中較名貴的中藥材，其鱗莖可以有效止咳、祛痰、清熱潤肺，尤其適合于老年人和兒童久治不愈的頑固性虛寒咳嗽。暗紫貝母在中藥材市場上的需求量特別高，但是其鱗莖生長速度特別慢，從種子長成商品藥材一般需要四年的時間，由于貝母藥效好、價值高,加上人工種植難度大、繁殖系數低、生長周期長，因此商品藥材價格一直居高不下，并且近年來需求量越來越大，導致暗紫貝母的價格也越來越高。野生的暗紫貝母主要分布在地勢高亢寒冷、日照強烈、空氣干燥、春秋短暫的地區生長。主產區若爾蓋、紅原兩縣因受地形、寒流等影響，常年無夏，這種氣候特點構成了暗紫貝母生長的特殊環境條件，所以這種特殊的生長環境決定了暗紫貝母在田間及人工種植比較困難，為了擴大暗紫貝母的繁殖，利用組織培養技術進行快速繁殖十分必要。目前對貝母的組織培養技術的研究已經初具規模，但是對暗紫貝母的研究還不是很多，并且繁殖方法還沒有成規模，沒有形成一套完整的繁殖體系。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種利用組織培養技術繁殖暗紫貝母的方法，為暗紫貝母的快速增殖提供一套完整的組織培養繁殖體系。

為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是：?

一種利用組織培養技術快速繁殖暗紫貝母的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）材料的選擇與消毒：首先選用生長健壯、成熟的新鮮的暗紫貝母鱗莖球，剝去鱗莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗30?min后放入清水中浸泡15min，用50％多菌靈500倍液浸泡20-30?min后，將鱗莖球一層一層的剝開，再在紫外燈下照射20?min，繼而轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70-75?%的乙醇浸泡10秒，然后用無菌水沖洗，再轉入滴加了2～3滴土溫80的0.1?%的升汞溶液中浸泡5min，用無菌水沖洗4次；?

（2）材料的處理：將消毒處理好的鱗片用無菌濾紙吸干，在無菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開來，分別切成4-6mm的小塊；

（3）初代培養：在無菌的條件下將步驟（2）得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在在MS常規培養基中添加了1.0mg/L的6-BA、1.2mg/L的NAA、?0.4mg/L的ZT；培養溫度為26℃，光照時間14?h/d，光照強度22?00?Lx，PH為?6.5，瓊脂5?g/L，經過15-20天形成愈傷組織；

（4）繼代培養：將初代培養的愈傷組織切下接種在繼代培養基上，該培養基是在3/4MS常規培養基中添加了0.5mg/L的6-BA、0.4?mg/L的NAA、0.3mg/L的KT和30mg/L的蔗糖，培養溫度為22℃，光照周期13h/d，光強度為2500lux，PH?6.5，經過4-5天時間分化出細芽后，升高培養溫度到25℃，光照周期為14h/d，光強度為2800lux，繼續培養6-10天便可分化出一簇一簇的小鱗莖；

（5）生根培養：將分化出來的小鱗莖一個個分別接種于下列誘導培養基中進行生根誘導：?MS培養基、1.5mg/L的活性炭、6g/L的瓊脂、0.3mg/L?的IBA、0.4mg/L的KT，培養溫度為23℃，光照周期12h/d，光強度為2000lux，PH值為6.0，經過20-25天待小鱗莖長至3cm高，當根系比較健壯并且長出6-10個根時，即開始下一個階段；

（6）生根試管苗溫室煉苗移栽：將生根的試管苗開瓶后置溫室溫度在25-28℃，濕度80-85％，光照強度在5000-5500lx條件下煉苗3-5天后，洗掉苗上的培養基，將其移栽到由羊糞、腐殖土、珍珠巖的混合比例為1∶3∶2?的苗床上。當外界夜間溫度在10-15℃，白天溫度在18-25之間時把試管苗進行移栽，在移栽初期的5天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持濕度在80%以上，并且控制光照強度在2700-3300lx，之后逐漸揭去薄膜并適當增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。

本發明的有益效果是：

（1）?本發明采用新鮮的暗紫貝母鱗莖球作為外植體進行繁殖，鱗莖球的利用率很高，達到95%以上，并且培育出來的植株枝葉茂盛，根系發達，植株生長旺盛；一個直徑4cm鱗莖球大約能夠繁殖150-200個小鱗莖，即能夠利用有限的資源進行繁殖，繁殖系數很高。

（2）在繼代培養過程中當愈傷組織分化出細芽后，升高培養溫度，提高光照周期和光照強度，這樣縮短了培養時間。