[發(fā)明專利]精氨酸脫亞氨基酶基因工程菌的構(gòu)建及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310210386.4
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN104212753A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬承國;程占冰;王開成;李金龍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海凱圣生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/55;C12N15/70;C12P13/10;C12R1/19
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1.?一種含有精氨酸脫亞氨基酶的大腸桿菌基因工程菌的構(gòu)建方法及其用途，其特征在于，包括將精氨酸脫亞氨基酶基因連接，構(gòu)建重組pET28a質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞，以及利用重組酶或大腸桿菌基因工程菌用于生產(chǎn)L-瓜氨酸的方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述大腸桿菌基因工程菌為大腸桿菌（Escherichia?coli）BL21?CGMCC?No.7491和大腸桿菌（Escherichia?coli）BL21?CGMCC?No.7492。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述精氨酸脫亞氨基酶基因含有核苷酸序列SEQ?ID：No.?1或SEQ?ID：No.3，含有氨基酸序列SEQ?ID：No.?2或SEQ?ID：No.4。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述精氨酸脫亞氨基酶基因是通過擴增獲得，以含有精氨酸脫亞氨基酶基因序列的環(huán)境微生物群落基因組為模板，在其上游設(shè)計Nde?I酶切位點，在其下游設(shè)計Hind?III酶切位點，其引物為：

ADIPF：5’-?GGAATTCCATATGTCCGCTGAAAAACAGAAGTACG-3’

ADIPR:?5’-?CCCAAGCTTAGTAATCGATCGGGTCAC-3’?。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建重組pET28a質(zhì)粒中，以所述擴增的精氨酸脫亞氨基酶基因經(jīng)加A反應(yīng)后用T4連接酶連接，導入大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞。

6.根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述誘導表達：培養(yǎng)基因工程菌細胞至對數(shù)期，加入誘導劑誘導3-8小時，培養(yǎng)溫度25-37℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生產(chǎn)L-瓜氨酸的方法，濕菌體用量1%，精氨酸底物濃度在10%左右，精氨酸轉(zhuǎn)化率99%。