[發明專利]鮑魚菇蛋白質提取物及其抗腫瘤的應用

在審

• 申請號: 201310210364.8
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN103272217A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 趙爽;劉宇;耿小麗;許峰;王蘭青;王守現;陳杰;楊娟娟;尹昭坤
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00;A61K36/07;C07K2/00;C07K1/30;C07K1/36;C07K1/34;A61P35/00;A23L1/28;A23L1/305
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及鮑魚菇蛋白質提取物及其抗腫瘤的應用。

背景技術

鮑魚菇(Pleurotus?abalonus)，屬于擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、側耳科、側耳屬，鮑魚菇又名臺灣平菇，子實體肥大，菌肉致密，風味似鮑魚，脆嫩爽口，是一種高溫出菇的食用菌。因鮮菇耐貯藏，適于制罐，為亞熱帶地區著名食用菌。

目前，對于鮑魚菇的研究主要集中在對鮑魚菇栽培條件和栽培方式的優化，不同配方培養料會影響鮑魚菇的菌絲生長速度、子實體的性狀、營養成分和產量表現。有關鮑魚菇子實體提取物活性研究的資料較少。王常榮研究發現，鮑魚菇子實體中含有多種抗氧化活性物質。綜合運用凝膠層析以及液相色譜/質譜聯用技術等多種分離純化及分析方法從鮑魚菇中獲得并鑒定出生物堿和皂昔類物質兩種抗氧化活性成分，為鮑魚菇作為一種天然抗氧化劑的開發與應用奠定了理論基礎。陳蓉蓉檢測了鮑魚菇提取物對糖尿病小鼠胰腺胰島素、超氧化物歧化酶（SOD）、胰島素激活因子（PDX-1）基因表達水平的影響，研究發現各基因表達水平明顯提高，鮑魚菇提取物能通過提高胰腺的抗氧化能力發揮降血糖作用。目前從鮑魚菇子實體中分離純化蛋白及其對腫瘤細胞進行殺傷的研究尚屬空白。

發明內容

本發明所要解決的一個技術問題是提供具有抗腫瘤活性的鮑魚菇蛋白質提取物。

本發明所提供的鮑魚菇蛋白質提取物，按照包括如下步驟的方法制備：

1）將鮑魚菇子實體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質得到鮑魚菇水溶性提取物；

2）對所述鮑魚菇水溶性提取物進行飽和度為80%的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對所述沉淀用去離子水透析后，得到所述鮑魚菇蛋白質提取物。

上述步驟1）中，所述用水浸提可為在2-6℃用水浸提10-14小時。所述水可為去離子水。

所述鮑魚菇子實體可為新鮮的子實體也可為干燥的子實體。所述干燥的子實體是將新鮮的鮑魚菇子實體在常溫（如20-25℃）下干燥得到的。

所述新鮮鮑魚菇子實體和水的體積比可為1：4-6，如1：4。

上述步驟1）中，可采用離心收集所述水溶性物質。離心收集所述水溶性物質的離心力可為6000-15000g（如12000g），離心時間可為10-20分鐘（如15分鐘）。上述步驟2）中，也可采用離心收集所述沉淀。離心收集所述沉淀的離心力可為6000-15000g（如12000g），離心時間可為10-20分鐘（如15分鐘）。

上述步驟2）中，在4℃對所述鮑魚菇水溶性提取物進行飽和度為80%的硫酸銨沉淀。

上述步驟2）中，所述用去離子水透析采用截留分子量為3kDa半透膜進行。

上述制備方法還包括將透析后的半透膜內的液體在3000-9000g（如6000g），離心10-20分鐘（如15分鐘），收集上清液，將該上清液進行冷凍干燥，制備成鮑魚菇蛋白質提取物干粉的步驟。

本發明所要解決的另一個技術問題是提供上述鮑魚菇蛋白質提取物的用途。

本發明所提供的上述鮑魚菇蛋白質提取物的用途，為下述A或B：

A、抗腫瘤或腫瘤細胞的產品（如藥物、保健品和/或食品），其活性成分為上述鮑魚菇蛋白質提取物；

B、上述鮑魚菇蛋白質提取物在制備抗腫瘤或腫瘤細胞的產品（如藥物、保健品和/或食品）中的應用。

上述用途中，所述腫瘤可為實體腫瘤。

所述實體腫瘤可為肝癌、乳腺癌和/或肺癌；所述腫瘤細胞可為肝癌細胞、乳腺癌細胞和/或肺癌細胞。所述肺癌可為肺腺癌，所述肺癌細胞可為肺腺癌細胞。

所述肝癌細胞可為人肝癌細胞，如HepG2細胞；所述乳腺癌細胞可為人乳腺癌細胞，如MCF-7細胞；所述肺癌細胞可為人肺腺癌細胞，如A-549細胞。

上文中，所述鮑魚菇具體可為鮑魚菇(Pleurotus?abalonus)CFCC89572。

本發明的鮑魚菇蛋白質提取物處理人肝癌HepG2細胞、人乳腺癌MCF-7細胞和人肺腺癌A-549細胞72h后，HepG2、MCF-7、A-549細胞的增殖均明顯受到抑制，且IC₅₀值分別為6μg/mL,6μg/mL，12μg/mL,并且抑制率均隨時間延長和濃度的增加而增加；光鏡下可觀察細胞凋亡形態的改變。說明鮑魚菇蛋白質提取物對HepG2、MCF-7、A-549細胞均有顯著的抑制增殖作用，可用于制備抗腫瘤或腫瘤細胞的產品。

附圖說明

圖1為BCA蛋白定量試劑盒制作標準曲線。