[發明專利]趨化因子誘餌受體CCX-CKR在結直腸癌中的表達的評估模型的建立方法

無效

• 申請號: 201310210167.6
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN103344762A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發明（設計）人: 崔龍;湯文濤;朱云祥;劉云;王光輝
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬新華醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N1/30
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 左祝安

技術領域

本發明涉及一種受體，特別涉及一種趨化因子誘餌受體CCX-CKR在結直腸癌中的表達的評估模型的建立方法。

背景技術

結直腸癌是全球第三的常見的惡性腫瘤，并占腫瘤引起的死亡的第四位。遠處轉移是結直腸癌患者死亡最主要的原因。未轉移結直腸癌患者5年生存率為80%-90%，但發生遠處轉移時5年生存率僅為10%-20%。盡管有大量的分子已經被證實參與腫瘤的轉移，腫瘤轉移的具體機制仍不是很清楚。

趨化因子及趨化因子受體通過調節腫瘤細胞生長、腫瘤血管生成、腫瘤淋巴細胞侵潤參與了腫瘤轉移。CXCR4/CXCL12(SDF-1)軸是腫瘤轉移相關趨化因子軸中研究最為廣泛的，參與了人體多種惡性腫瘤的轉移包括乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、結直腸癌等。除了CXC4/CXCL12(SDF),研究證實CCR7/CCL19(CCL21)，CCR9/CCL25，CXCR5/CXCL13等相互作用也參與了結直腸癌的轉移。

CCX-CKR能夠結合和清除相應的配體CCL19，CCL21，CCL25，CXCL13。這些趨化因子分別與CCR7，CCR9以及CXCR5相互作用，參與腫瘤的細胞的轉移。Zeng等報道CCX-CKR在侵潤性乳腺癌中的表達與淋巴轉移和腫瘤分期成顯著的負相關關系，并且是乳腺癌無復發生存率的有利因素。Zhu等研究報道CCX-CKR與胃癌總生存率有關，但CCX-CKR在結直腸癌未有報道。

發明內容

針對上述問題，本發明提供一種趨化因子誘餌受體CCX-CKR在結直腸癌中的表達的評估模型的建立方法，以解決現有技術中的在結直腸癌領域研究空白的問題。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

趨化因子誘餌受體CCX-CKR在結直腸癌中的表達的評估模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）準備組織樣本

（1.1）收集標本

標本包括結直腸癌組織及配對的正常結直腸組織，將離體后的標本立即固定于10%福爾馬林緩沖液中并進行石蠟包埋；

其中，所述標本的供體在術前未進行過化療或者放療治療。手術切除腫瘤后，根據結直腸癌治療指南，給予化療或放療治療。

（1.2）制作組織芯片

每個標本都經組織病理學診斷后，制成組織芯片；

（2）免疫組織化學染色

包含有結直腸癌組織及毗鄰正常結直腸組織的組織芯片被用于檢測CCX-CKR蛋白的表達，通過親和素-生物素-免疫過氧化物酶方法；

其中，CCX-CKR染色在顯微鏡下，由兩個獨立的操作員進行評分，并且兩個操作員不知道預后。

染色結果采用染色比例得分與染色強度得分的乘積；

其中，所述染色比例得分為：0分為0%，1分為>0%-≤25%，2分為>25%-≤50%,3分為>51%-≤75%，和4分為>75%。

其中，所述染色強度得分為：0分為否定結果(negative?result),1分為弱的(weakly?positive),2分為中等的(moderately?positive)和3分為強的(strongly?positive)

其中，所述染色結果的評分低于6分評估為低表達，而大于等于6分評估為高表達。

（3）統計學分析

卡方檢驗用于統計CCX-CKR表達與臨床病理參數的關系，Kaplan-Meier曲線用于統計患者的總生存率，組之間的統計意義用log-rank?test評價；

其中，所述統計學分析采用SPSS12.0軟件,P值小于0.05。

本發明的有益效果：

通過本發明的方法，得出結直腸癌組織中CCX-CKR表達明顯低于正常結直腸組織。CCX-CKR表達上調與結直腸癌淋巴結轉移負相關，并與結直腸癌早期TNM分期顯著相關。CCX-CKR表達上調提示結直腸癌患者術后擁有更高的總生存率，從而在臨床實踐中給予患者更為準確的預后判斷。

附圖說明

圖1A為缺失的結直腸癌組織中CCX-CKR表達情況。

圖1B為缺失的正常結直腸組織中CCX-CKR表達情況。

圖2A為弱的結直腸癌組織中CCX-CKR表達情況。

圖2B為弱的正常結直腸組織中CCX-CKR表達情況。

圖3A為中等的結直腸癌組織中CCX-CKR表達情況。

圖3B為中等的正常結直腸組織中CCX-CKR表達情況。