[發明專利]基質金屬蛋白酶-2多肽抑制劑及其應用

有效

• 申請號: 201310209035.1
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN103304634A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 羅瑞雪
• 申請（專利權）人: 蘇州普羅達生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P29/00
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技術領域

本發明涉及基質金屬蛋白酶-2多肽及其應用，具體涉及具有抑制基質金屬蛋白酶-2、具有減輕急性炎癥反應對機體破壞的多肽。?

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背景技術

膿毒血癥(sepsis)一直是一個嚴重的醫學問題。早期膿毒血癥不經過及時有效治療可進展為重癥膿毒血癥和膿毒血癥性休克，兩者死亡率分別為20%～30%和40%～70%?。醫學界一直在研究有效的治療手段，如早期對癥治療、激活蛋白C、皮質激素治療等。近年來隨著醫學研究的深入，對膿毒血癥的認識和治療取得了很大進展。其中，基質金屬蛋白酶-2(?MMP-2)在內毒素休克中扮演著重要角色。?

????基質金屬蛋白酶是一組由20幾種結構相似和功能相關的蛋白內切酶組成。它們可以發揮正常的生理功能，例如卵細胞著床，骨骼生長和器官發育等；這些酶還可以在諸如炎癥，傷口愈合和腫瘤細胞轉移中發揮病理作用?；|金屬蛋白酶被更多的看作是這些病理過程的調節因子。在基質金屬蛋白酶家族中，MMP－2?和MMP－9，?是MMP?家族的重要成員，分別編碼72kDa?和92kDa?的明膠酶A?和明膠酶B。正常穩定狀態下，組織較少合成、分泌MMP－2，在炎癥、腸化、增生和損傷等刺激下，細胞內部調控平衡機制紊亂，合成、分泌MMP－2?增多。?

中性粒細胞是循環系統中最豐富的白細胞，在機體受到細菌感染時，中性粒細胞可迅速作出反應，首先進入被感染部位，構成了機體免疫系統應對細菌感染的第一道防線。中性粒細胞的細胞顆粒中儲存有不同種預先產生的酶類，包括彈性蛋白酶（elastase），?基質金屬蛋白酶-8（MMP-8）和基質金屬蛋白酶-2（MMP-2）等?；|金屬蛋白酶-8可切割膠原蛋白（collagen），?基質金屬蛋白酶-2可繼續把變性的膠原蛋白或明膠切割成更小的片段?；|金屬蛋白酶-2本身也有切割Ⅳ型膠原蛋白的活力，Ⅳ型膠原蛋白是血管基底層的主要成分。與其它細胞不同，中性粒細胞不表達基質金屬蛋白酶-2和基質金屬蛋白酶抑制因子-1?（TIMP-1）。這使得中性粒細胞在受到諸如LPS，IL-8和PMA等的刺激時，迅速釋放胞內顆粒，而釋放的基質金屬蛋白酶類可被同時釋放的有氧自由基激活，在局部具有較高的濃度。?這些酶除了具有正常的殺菌功能外，在病理條件下可能會對機體造成很大的破壞。內毒素模型就是一個很好的例子，在高劑量靜脈注射LPS后（8mg/kg小鼠），小鼠循環系統中的中性粒細胞可迅速釋放胞內顆粒的內容物，血液中的基質金屬蛋白酶-2的濃度在30分鐘時就可以達到峰值，其酶活力可以發揮諸如破壞血管基底層等作用，并推進了休克癥狀的發展。這一點可由基質金屬蛋白酶-2缺失（knockout）小鼠對內毒素休克的抑制作用證明。所以，基質金屬蛋白酶-2可以作為以中性粒細胞為主的炎癥反應的主要靶點。?

基質金屬蛋白酶-2的抑制劑包括大分子和小分子。?大分子抑制劑的制備和使用限制了它們的發展，例如重組人金屬基質蛋白酶組織抑制因子-3的體內半衰期只有4分鐘。很多成功的小分子抑制劑，例如Marimastat，可以在納摩爾水平上抑制基質金屬蛋白酶的活力，但小分子抑制劑缺乏特異性，如果在慢性疾病中長期使用缺乏特異性的基質金屬蛋白酶抑制劑可產生副作用。?因而，從基質金屬蛋白酶酶抑制劑的應用角度來看，以急性炎癥反應作為研究對象是正確的選擇。在急性反應期，機體能夠耐受短期的、金屬介質蛋白酶-2廣譜抑制劑對正常生理功能的抑制，同時使關鍵組織器官的生理結構免受破壞，增加了生存幾率。?

通過化學方法合成了多肽抑制劑。這條多肽抑制劑可以選擇性的抑制基質金屬蛋白酶-8，基質金屬蛋白酶-2和腫瘤壞死因子釋放酶的活力，在用內毒素模型檢測多肽抑制劑體內活力的實驗中，多肽抑制劑能夠使小鼠避過了注射LPS后血液中基質金屬蛋白酶-2的高峰期（30分鐘血液濃度達到峰值）并抑制了腫瘤壞死因子（TNF-α）的釋放（1小時時血液濃度達到峰值），從而有效的保護了小鼠，度過了急性炎癥反應期，增加了小鼠的生存率。?

目前，國際上開發出的基質金屬蛋白酶抑制劑已進入Ⅱ期臨床（多發性硬化癥，類風濕性關節炎等）和三期臨床（牙周炎等）。本專利中的多肽抑制劑已證明在急性炎癥反應中有效，具有在其他炎癥模型中開發的前景。?

發明內容

發明目的

????本發明提供全新的序列，該序列基質金屬蛋白酶-2抑制劑，對急性炎癥具有很好的療效。

技術方案