[發明專利]水稻白葉枯病菌中的酸性還原酮加雙氧酶的鑒定方法

有效

• 申請號: 201310207831.1
• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN103276049A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 夏更壽
• 申請（專利權）人: 麗水學院
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;C12Q1/02;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19;C12R1/64
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務所 33233
• 代理人: 陸永強

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，涉及一種水稻白葉枯病菌中的酸性還原酮加雙氧酶的鑒定方法。

背景技術

甲硫氨酸急救途徑（the?methionine?salvage?pathway,MSP）廣泛存在于真核和原核生物中錯誤！未找到引用源。。酸性還原酮加雙氧酶（E2）催化很多原核和真核生物中的甲硫氨酸急救途徑（MSP）倒數第二步。目前研究該酶的代表性生物主要是酵母，但很多物種中該酶并沒有被鑒定和驗證。

MSP是甲硫氨酸再循環途徑，調節一些重要代謝物，其中包括S-腺苷酰甲硫氨酸（S-adenosylmethionine,簡稱SAM或AdoMet）和甲硫基腺苷（methylthioadenosine,簡稱MTA）。SAM由甲硫氨酸合成，提供不同的基團生成其它代謝產物，調節甲基化或者基因表達錯誤！未找到引用源。。SAM合成多氨過程中生成MTA，MTA是多氨合成和轉甲基反應的抑制子錯誤！未找到引用源。。多氨是細胞生長和增殖所必需的錯誤！未找到引用源。。因此，細胞內MTA濃度必須得通過MSP嚴格控制。

酸性還原酮加雙氧酶（ARD）催化MSP倒數第二步錯誤！未找到引用源。?？死撞暇鷮伲↘lebsiella）菌株8724中一種形式的酸性還原酮加雙氧酶(FeARD′)含有一個二價鐵離子（Fe²⁺），轉變1,2-二羥基-3-酮-5-甲硫基-1-戊烯

（1,2-dihydroxy-3-oxo-5-(methylthio)pent-1-ene，酸性還原酮)生成甲酸鹽和2-酮-4-甲硫基丁酸鹽（2-keto-4-methylthiobutyrate，KMTB)。KMTB是MSP中甲硫氨酸的前體。8724菌株中另一種形式的酸性還原酮加雙氧酶(NiARD)含有一個二價鎳離子Ni²⁺，催化與FeARD′相同底物的氧化支路生成一氧化碳、甲酸鹽和甲硫基丙酮酸鹽（methylthiopropionate）錯誤！未找到引用源。。這兩種形式的酶多肽序列相同，且都是稱為cupins的結構超家族成員錯誤！未找到引用源。，唯一的不同之處是含有不一樣的金屬離子錯誤！未找到引用源。。FeARD′和NiARD中與鐵離子和鎳離子作用的四個殘基也相同，分別是His96,His98,Glu102和His140錯誤！未找到引用源。。NiARD催化的反應生成產物之前形成一個四個原子的過氧化物環，而FeARD′催化的反應生成產物前形成一個五個原子的過氧化物環錯誤！未找到引用源。。這兩個酶的活性在枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）中都已被證實錯誤！未找到引用源。。

真核生物ARD的同源物表現出除ARD活性以外許多不同的作用錯誤！未找到引用源。。人類的ARD同源物——MTCBP1（membrane-type1matrix?metalloproteinase?cytoplasmic?tail?binding?protein-1，也被稱為hADI1），在酵母中被證實有ARD活性錯誤！未找到引用源。。過表達MTCBP1抑制由MT1-MMP(membrane-type1?matrix?metalloproteinase)促進的細胞移動和侵入錯誤！未找到引用源。。老鼠中ARD同源物——ALP1（ARD-like?protein1），有促進凋亡的活性并且被雄性荷爾蒙強烈誘導錯誤！未找到引用源。。MTCBP1和ALP1分別在人腫瘤細胞和鼠前列腺腫瘤細胞中表達下調錯誤！未找到引用源。。hADI1很可能在信使RNA(mRNA)加工過程中起作用錯誤！未找到引用源。。

水稻白葉枯病菌Xanthomonas?oryzae?pv.oryzae(Xoo)推測的MSP中已經鑒定了稀醇化酶-磷酸酯酶xep(Xanthomonas?enolase-phosphatase)基因錯誤！未找到引用源。。但Xoo推測的MSP中其它基因的功能還沒有被證實，這些基因對Xoo在水稻上致病性有沒有影響，影響程度有多大均不明確。

發明內容

本發明的目的是，提供了一種水稻白葉枯病菌中的酸性還原酮加雙氧酶的鑒定方法，用于克隆和鑒定水稻白葉枯病菌（Xanthomonas?oryzae?pv.Oryzae）中的酸性還原酮加雙氧酶E2，填補了水稻白葉枯病菌甲硫氨酸急救途徑中所涉及的酶的一個空白。