[發(fā)明專利]區(qū)分大白菜TNL-E基因野生/突變狀態(tài)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310207605.3
• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN103290125A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉栓桃;趙智中;張曉燕;張志剛;李巧云;王淑芬;盧金東;徐文玲;劉賢嫻;付衛(wèi)民;崔莎莎;田煥煥
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

1.一種鑒定大白菜TNL-E家族基因野生型和突變體的顯性標(biāo)記，其特征在于：該標(biāo)記命名為ASM-TNL-E-01，該標(biāo)記片段大小1367bp，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

2.用于鑒別權(quán)利要求1所述的顯性標(biāo)記的引物，其特征在于：

正向引物TNL1F：5'-TGAAACTTTCATTCAGCTTCAAGT-3'；

反向引物TNL1R：5'–TTGGGTTAGTTTTCAACTTTCACA-3'；如SEQ?ID?NO.2、3所示。

3.權(quán)利要求1所述的顯性標(biāo)記在大白菜種質(zhì)資源鑒定和育種輔助選育中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求2所述的引物在大白菜種質(zhì)資源鑒定和育種輔助選育中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于：具體應(yīng)用方式為：利用SEQ?ID?NO.2、3所示的引物對待測個體的基因組DNA進行PCR擴增，檢測擴增片段的有無，如果擴增出1367bp的條帶，則基因組中含有野生型基因，不能擴出條帶，則該基因發(fā)生了突變。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于：所述PCR擴增的條件為：在20μl反應(yīng)體系中，包含1×LA?taq?buffer；20ng的基因組DNA；0.4μM正反向引物；0.25mM?dNTPmix；1個單位的LA?taq。PCR循環(huán)條件：95℃預(yù)變性5分鐘；接著是95℃變性30秒，57.5℃退火30秒，72℃延伸5分鐘，35-38個循環(huán)，最后72℃延伸10分鐘。