[發明專利]非水相催化手性醇不對稱拆分的立體選擇性脂肪酶的快速定量篩選方法

有效

• 申請號: 201310205521.6
• 申請日: 2013-05-27
• 公開（公告）號: CN103344585A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發明（設計）人: 于麗娟;葉輝;金大勇;常燕;徐磊;劉思園;王興龍
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 南通市永通專利事務所 32100
• 代理人: 葛雷

1.一種非水相催化手性醇不對稱拆分的立體選擇性脂肪酶的快速定量篩選方法，其特征是：利用脂肪酶在無溶劑體系中分別催化脂肪酸乙烯酯與兩種立體構型的手性醇之間的轉酯化反應，所述脂肪酶是采用由脂肪酶生產菌制備成的細胞凍干粉或發酵液凍干粉；反應4-24小時后，吸取50?μl兩種構型手性醇的反應液用100?μl品紅醛在微量比色皿或多孔微孔板中顯色，用比色法于500-540nm處測定吸光度或直接用酶標儀于500-540?nm處測定吸光度，以確定乙醛的生成量，并根據兩種立體構型的手性醇反應生成乙醛的量計算產物對映體過剩量、底物對映體過剩量和酶立體選擇性，篩選出生產立體選擇性脂肪酶的目的菌株。

2.根據權利要求1所述的非水相催化手性醇不對稱拆分的立體選擇性脂肪酶的快速定量篩選方法，其特征是：所述脂肪酸乙烯酯是脂肪酸鏈長為C₁-C₁₆的脂肪酸乙烯酯。

3.?根據權利要求1所述的非水相催化手性醇不對稱拆分的立體選擇性脂肪酶的快速定量篩選方法，其特征是：轉酯化反應條件為：手性醇濃度為0.001-1.5?mmol/ml，反應溫度30-60℃，反應時間4-24小時，搖床轉速200轉/分鐘，脂肪酶濃度為10-1500?U。

4.?根據權利要求1所述的非水相催化手性醇不對稱拆分的立體選擇性脂肪酶的快速定量篩選方法，其特征是：所用多孔微孔板為96孔微孔板。

5.?根據權利要求1所述的非水相催化手性醇不對稱拆分的立體選擇性脂肪酶的快速定量篩選方法，其特征是：品紅醛的配制方法：

稱取堿性品紅0.075?g溶于少量80℃熱蒸餾水中，使之充分溶解，待溶液冷卻后過濾，加入5.3?g?Na₂SO₃，1.5?ml濃硫酸，并移入100?ml容量瓶中，搖勻，放氣，定容至100?ml；放置暗處，靜置24h，溶液褪色且清亮透明，于4℃冰箱中避光保存。