[發明專利]一種對煙草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物質的提取方法

有效

• 申請號: 201310205446.3
• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN103262862A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 廖曉蘭;張亞;蘇品;黃璜;劉雙清;夏日照;仇佳偉;尹偉
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: A01N65/08
• 分類號: A01N65/08;A01P3/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

技術領域

本發明屬于生物農藥技術領域，具體涉及一種對煙草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物質的提取方法，更具體地說，是莧菜葉抑菌活性物質的提取方法。

背景技術

在農業生產上，防治植物有害生物的化學農藥應用十分廣泛，如：殺蟲劑、殺菌劑、除草劑等。化學農藥在保證糧食增產方面起著重要的作用。盡管化學農藥具有速效、加工容易、防治有害生物效果明顯等優勢，但由于其存在污染環境、破壞生態平衡、農藥殘留、病菌產生抗藥性等一系列問題，探索新的防治方法十分必要。

目前，采用生物防治不僅安全、高效、低毒、無污染，而且可解決化學農藥費用高，抗藥性等問題，具有廣闊的發展前景。植物是生物活性化合物的天然寶庫，可產生的次生代謝產物超過40萬種，其中的大多數為萜類、堿類、黃酮、酚類等殺蟲或殺菌的活性物質。從植物中探尋新的活性物質或新的作用靶標，已成為當前研究的熱點。

莧菜是莧科莧屬的一年生草本植物，其營養十分豐富。最新的研究結果表明：莧菜不僅可作為蔬菜、糧食、飼料等，而且具有抗氧化、抗癌、保護肝臟等醫療作用。近年來，隨著莧菜研究的不斷深入，發現莧菜提取物對腐生菌，如：沙門菌（Salmonella?spp.）、大腸桿菌（Escherichia?coli）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus?aureus）、李斯特菌（Listeria?monocytogenes）等具有抑制作用。而且其種子提取物中存在抗菌肽，對荔枝酸腐病菌（Geotrichum?candidum）、茄病鐮刀菌（Fusrium?solani）、產黃青霉（Penicillium?chryso-genum）、亮白曲霉（Aspergillus?candidus）等也具有抑制作用。目前，有關莧菜抑菌物質對植物病原物的研究報道較少，已有人利用鮮莧菜葉汁液對煙草青枯病菌進行了生物測定，發現具有抑制作用，而且盆栽效果較好。但從莧菜葉中提取抑菌物質的方法未見報道，本發明人基于這一點，進行了莧菜葉抑菌物質的提取方法研究，旨在為開發新的植物源農藥提供理論依據。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：針對上述現有技術的不足，提供一種對煙草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物質的提取方法。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：一種對煙草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物質的提取方法，該方法步驟如下：

A、用分析純乙酸乙酯對莧菜葉粉末進行浸提，莧菜葉粉末一次性加入，乙酸乙酯分3次加入，每次按1g莧菜葉粉末加10-20mL乙酸乙酯的比例加入后，于搖床上在20-25℃下以90-120r/min振搖24-36h，過濾，收集濾液，合并3次濾液；

B、將所得濾液置入旋轉濃縮蒸發儀，在0.09-0.1MPa氣壓、水浴溫度為40-43℃和冷凝溫度為8-10℃條件下，80-120r/min濃縮至膏狀。

上述莧菜葉粉末是取莧菜葉洗凈后曬干至含水量為0.5-3.5%，以8000-12000r/min的轉速粉碎3-6min至100-120目細粉。

與現有技術相比，本發明具有的優點為：

1、提取方法簡單、快捷、操作方便，易推廣和應用。

2、分離方法所需的材料易購買，分離速度快，不污染環境，對人畜安全環保，節省成本，節約資源。

附圖說明

圖1是莧菜葉乙酸乙酯提取物的48h抑菌效果圖；

其中：1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。

具體實施方式

下面結合具體試驗和實施例對本發明的技術方案作進一步說明。

本發明所使用的原料莧菜葉可以通過種植或購買，生產技術成熟；原料供應充足，獲得途徑多樣。

實施例中用到的病原菌種煙草青枯病菌（Pseudomonas?solanacearum）由湖南農業大學植物病理學實驗室提供。該菌種的活化：采用接種環刮取3環煙草青枯病菌菌種接入牛肉膏蛋白胨斜面培養基，28℃下培養24-48h。實施例1

取莧菜葉洗凈后曬干，用高速粉碎機以12000r/min的轉速粉碎3min至100-120目細粉，獲得莧菜葉粉末。取莧菜葉粉末10g裝入三角瓶中，用分析純乙酸乙酯對莧菜葉粉末進行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加100mL后，置三角瓶于搖床上在20℃下以90r/min振搖36h，過濾，收集濾液，合并3次濾液，將濾液裝入旋轉濃縮蒸發儀，在0.09MPa氣壓、水浴溫度為40-43℃和冷凝溫度為8-10℃條件下，80r/min蒸發濃縮至膏狀，得黑色提取物。