[發明專利]一種熒光增強檢測含巰基氨基酸的熒光分子探針的合成及應用

無效

• 申請號: 201310203041.6
• 申請日: 2013-05-28
• 公開（公告）號: CN103351335A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發明（設計）人: 宋相志;賀偉杰;韓逸飛
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C07D215/20
• 分類號: C07D215/20;G01N21/64;G01N21/78
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技術領域

本發明涉及的是化學分析檢測技術領域，具體涉及一種熒光增強檢測含巰基氨基酸的熒光分子探針的制備方法以及其在檢測含巰基氨基酸方面的應用。?

背景技術

含有巰基的半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和還原性谷胱甘肽(GSH)在許多生理過程中扮演著重要的角色。例如，半胱氨酸(Cys)被認為與一些疾病緊密相關，如老年癡呆癥和帕金森氏病，動脈粥樣硬化性血管疾病，冠狀動脈心臟疾病以及腎功能衰竭。還原性谷胱甘肽(GSH)是主要的內源性抗氧化劑，被視為氧化應激能力的指示劑，生物體內巰基含量也可能受到一些氧化應激反應的影響。同時，利用巰基探針識別生物體釋放出的硫醇可以用于間接檢測相關生物酶以及評價相應抑制劑的活性。因此，尋求快速、靈敏、選擇性檢測生物巰基的方法越來越受到人們的重視(Giles?NM.，Watts?AB，Giles?GI，Fry?FH，Littlechild?JA，Jacob?C.Metal?and?redox?modulation?of?cysteine?protein?function.[J]Chemistry&biology2003；10(8)：677-693.Wang?W，Rusin?O，Xu?X，Kim?KK，Escobedo?JO，Fakayode?SO，Fletcher?KA，Lowry?M，Schowalter?CM，Lawrence?CM，Fronczek?FR，Warner?IM，Strongin?RM.Detection?of?homocysteine?and?cysteine.[J]Journal?of?the?American?Chemical?Society2005；127(45)：15949-15958.Seshadri?S，Beiser?A，Selhub?J，Jacques?PF，Rosenberg?IH，D’Agostino?RB，Wilson?PW，Wolf?PA.Plasma?homocysteine?as?a?risk?factor?for?dementia?and?Alzheimer′s?disease.[J]New?England?Journal?of?Medicine2002；346(7)：476-483.)。?

目前，已經報道了一些分析方法來檢測，主要包括高效液相色譜(HPLC)，電化學方法，毛細管電泳，光分析和質譜技術以尋求對半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和還原性谷胱甘肽(GSH)的高效和快速檢測。但這些方法都是限用于生物體外實驗，難以應用于在活體細胞中檢測半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和還原性谷胱甘肽(GSH)。熒光探針作為一類小分子物質可以有效地穿透細胞膜從而可以專一地在活體細胞里成像，具有較好的靈敏性。因此，一些基于化學反應型的熒光探針已被報道，這些探針主要是利用Michael加成反應與醛基作用導致的成環反應以及裂解反應等完成化學轉化從而實現熒光探針對半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和還原性谷胱甘肽(GSH)的檢測。(Zhu?J，Dhimitruka?I，Pei?D.5-(2-Aminoethyl)dithio-2-nitrobenzoate?as?a?more?base-stable?alternative?to?Ellman′s?reagent.[J]?Organic?Letters2004；6(21)：3809-3812.Hu?M，Fan?J，Li?H，Song?K，Wang?S，Cheng?G，Peng?X.Fluorescent?chemodosimeter?for?Cys/Hcy?with?a?large?absorption?shift?and?imaging?in?living?cells.[J]Organic?Biomolecular?Chemistry2011；9(4)：980-983.Long?L，Lin?W，Chen?B，Gao?W，Yuan?L.Construction?of?a?FRET-based?ratiometric?fluorescent?thiol?probe.[J]Chemical?Communications2011；47(3)：893-895.)。?

目前報道的熒光探針大多數對半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和還原性谷胱甘肽(GSH)的響應基于熒光強度的改變，且大多數熒光探針只是在細胞外有良好的性能。因此，研制一種兼具顏色變化和熒光增強的熒光探針對探討半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和還原性谷胱甘肽(GSH)的生物學作用具有非常重要的意義。?

發明內容