[發(fā)明專利]MLDH-DNA超分子組裝型磁靶向探針

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310202893.3
• 申請日: 2013-05-28
• 公開（公告）號: CN103267840A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設計）人: 茍國敬;孫岳;董麗娥;閆乾順;許紅平;曹菊琴
• 申請（專利權(quán)）人: 寧夏醫(yī)科大學
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 徐淑芬

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學功能材料范疇，與基因物質(zhì)的生物靶向傳輸及示蹤技術(shù)有關(guān)，具體涉及一種MLDH-DNA超分子組裝型磁靶向探針。

背景技術(shù)

基因治療（Gene?therapy）指將外源正常基因?qū)氚屑毎约m正或補償因基因缺陷、變異，達到治療目的。但基因物質(zhì)，不論是修復后的基因片段、還是RNA干擾素dsRNA，由于體積大、易酶解、負電性強等原因很難進入細胞，基因物質(zhì)的化學轉(zhuǎn)移是制約基因治療應用的瓶頸問題。將外源基因?qū)肷锸荏w細胞的障礙主要有二方面，一是表面呈負電性的細胞壁對帶負電的DNA裸粒進入細胞構(gòu)成的天然靜電屏障，二是細胞液及溶酶體等酸性環(huán)境對基因轉(zhuǎn)運載體的溶蝕，使DNA很難逃脫核酸酶的降解。因此，實現(xiàn)外源基因與受體細胞基因組整合的過程非常復雜；大部分納米運載系統(tǒng)很難直接進入細胞內(nèi)部，更難有效攜帶DNA或dsRNA安全擴散到細胞核、穿過核膜孔進入胞核表達外源基因。層狀復合氫氧化物（Layered?double?hydroxide，LDH），因具有插層組裝與逆向交換釋放性能，優(yōu)越的細胞傳輸性能及與負電性DNA螺旋分子靜電結(jié)合的性能，成為生物傳輸研究的熱點；DNA經(jīng)共沉淀或離子交換進入層間后，堿性LDH層板在細胞液弱酸性（pH=?4~5）微環(huán)境下能對插載的DNA起有效保護及轉(zhuǎn)運作用。

利用熒光信號對基因轉(zhuǎn)導過程進行實時跟蹤是納米生物技術(shù)未來發(fā)展的趨勢，對了解基因轉(zhuǎn)運的細胞機制、活體轉(zhuǎn)染效果及相關(guān)的理論規(guī)律，建立高效轉(zhuǎn)運系統(tǒng)、開發(fā)有商用價值的基因產(chǎn)品有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種MLDH-DNA超分子組裝型磁靶向探針。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種MLDH-DNA超分子組裝型磁靶向探針，其特征是：以磁性層狀復合氫氧化物MLDH為載體，以核酸染料標記DNA為客體、用低溫離子交換法制備而成。

所述載體磁性層狀復合氫氧化物MLDH的組成符合化學式[Fe^II₂Fe^III(OH)₆][Cl??H₂O]。

所述磁性層狀復合氫氧化物MLDH的獲得過程為：

在N₂或Ar保護、0～50℃恒溫及300?rpm磁攪拌條件下，按摩爾比Fe²⁺/Fe^3+?=?2?：1配制FeCl₂·4H₂O、FeCl₃·6H₂O溶液，以一元強堿溶液作沉淀劑進行共沉淀反應，反應完成后經(jīng)過漿料原位晶化、固相析出和沉降、離心分離獲得磁性層狀復合氫氧化物MLDH；

所述一元強堿的濃度為1~2?mol??L^-1；

所述共沉淀反應的反應終點以pH到達5.5~7.0為準；

所述漿料原位晶化是在N₂或Ar保護、0～50℃恒溫及300?rpm磁攪拌條件下進行，晶化時間30?~?50?min；

所述固相析出和沉降是在-80?~?-20℃的冷乙醇中完成。

所述核酸染料標記DNA的獲得方法為：

先將核酸染料與質(zhì)粒按1:4?~?1:6摩爾比混合，輕輕渦旋分散，在避光及0?~?4℃條件下，靜態(tài)培育20?~?40?min，制成核酸染料標記DNA。

所述低溫離子交換法的工藝步驟為：在0?~?4℃及N₂或Ar保護條件下，將磁性層狀復合氫氧化物MLDH加水溶解，然后再加入核酸染料標記DNA溶液，低速攪拌或渦旋混勻，靜態(tài)培育20?~?50?min，之后離心分離即可。

所述層狀復合氫氧化物MLDH的用量按照DNA物質(zhì)的量的6.3????10⁴倍稱取。