[發(fā)明專利]N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑及其合成方法和用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310196609.6
• 申請(qǐng)日: 2013-05-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103242262A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅瑾;李宇航;楊隆河;陳玲;朱程剛;邱彥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D295/185
• 分類號(hào): C07D295/185;C07D295/192;C07D207/14;C07D207/08;C07D317/60;C12Q1/02
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種N-脂肪酰基乙醇胺水解酶（NAAA）抑制劑及其的合成。

背景技術(shù)

棕櫚酸乙醇胺（PEA）是一種內(nèi)源性的具有保護(hù)性的調(diào)節(jié)物質(zhì)，可以通過(guò)直接激活細(xì)胞核受體過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-α（PPAR-α），產(chǎn)生抗炎、鎮(zhèn)痛等多種藥理作用，可作用于中樞及感覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)、免疫細(xì)胞等多個(gè)靶點(diǎn)而發(fā)揮鎮(zhèn)痛抗炎作用（Mol?Pharmacol2005,67,15-19）。N-脂肪酰基乙醇胺水解酶（NAAA）能夠特異性地水解PEA，使PEA在體內(nèi)處于一種較低的水平（FEBS?Lett,1999,454,267-270），NAAA抑制劑可以有效地抑制NAAA活性，抑制PEA水解，提高PEA水平，達(dá)到治療疼痛和炎癥的作用（Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A,2009,106,20966-20971）。相比中樞類鎮(zhèn)痛藥，NAAA抑制劑的作用主要發(fā)生在外周系統(tǒng)以及炎癥部位（Biochem?J,2004,380,749-756），對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響比較小，無(wú)成癮性；相比阿斯匹林等COX抑制劑型抗炎鎮(zhèn)痛藥，不會(huì)引起腸胃出血，具有更好的藥物安全性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑及其合成方法和用途。

所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的結(jié)構(gòu)如下：

式中：A可以是-H，-CH₃或-CH₂OH；B可以是-H，-CH₃，-NH₂，-OH或=O；C可以是CO，SO，SO₂；D可以是含有15個(gè)C原子以內(nèi)的各種取代或未取代的：直鏈烷基，支鏈烷基，環(huán)烷基，烯基，炔基或芳香基。

所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的合成路線如下：

所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的合成方法，包括以下步驟：

1）將吡咯烷衍生物和堿加入有機(jī)溶劑中，再加入相應(yīng)的酰氯，反應(yīng)得到含有相應(yīng)的酰基吡咯烷的反應(yīng)液；

2）在步驟1）所得的反應(yīng)液中加入水進(jìn)行淬滅反應(yīng)，無(wú)機(jī)相用有機(jī)溶劑萃取，即可得到酰基吡咯烷的粗產(chǎn)物，經(jīng)提純得N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑。

在步驟1）中，所述有機(jī)溶劑可采用非極性有機(jī)溶劑，所述非極性有機(jī)溶劑可選自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、四氫呋喃、C2～C8的醚類、乙酸乙酯、丙酮等中的至少一種，所述有機(jī)溶劑的用量不限；所述吡咯烷衍生物與酰氯的物質(zhì)摩爾比可為1∶（1.2～2）；所述堿可采用無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿，所述堿可選自碳酸鈉，碳酸鉀，氫氧化鈉，氫氧化鉀，三乙胺，吡啶等中的至少一種；所述吡咯烷衍生物與堿的物質(zhì)摩爾比為1∶（1.5～2）；所述反應(yīng)的時(shí)間可為1～5h，反應(yīng)的溫度可為0～60℃。

所制得的N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的抑制活性可以通過(guò)以下方法檢測(cè)：

將純化的N-脂肪酰基乙醇胺水解酶蛋白與濃度梯度的待篩選化合物于37℃共同作用，加入含底物17∶1N-脂肪酰基乙醇胺的緩沖液再反應(yīng)。加入含有脂肪酸的甲醇液終止反應(yīng)。用HPLC-MS檢測(cè)水解產(chǎn)物17∶1FA的產(chǎn)量，用Graphpad?Prism5作圖，以此測(cè)定得到待測(cè)化合物對(duì)N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的IC₅₀值。

所述所制得的N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑可用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)PEA水平影響。所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)PEA水平影響可通過(guò)以下方法檢測(cè)：細(xì)胞與待測(cè)化合物共孵育4h，后用甲醇/水（1∶1，體積比）收集細(xì)胞，超聲破碎細(xì)胞后用氯仿萃取；離心收集下層有機(jī)層，氮?dú)獯蹈珊笥煤线m的溶劑重新溶解后用LC-MS檢測(cè)PEA的含量。

棕櫚酸乙醇胺（PEA）是一種內(nèi)源性的具有保護(hù)性的調(diào)節(jié)物質(zhì)，具有抗炎，鎮(zhèn)痛等多種藥理作用。N-脂肪酰基乙醇胺水解酶（NAAA）是PEA的特異性水解酶，NAAA抑制劑可以抑制NAAA的活性，提高體內(nèi)的PEA水平，有潛在的抗炎鎮(zhèn)痛的藥理作用。

附圖說(shuō)明

圖1為3000rpm離心收集下層有機(jī)層，氮?dú)獯蹈珊笥?∶1甲醇/氯仿100μL重新溶解后用LC-MS檢測(cè)內(nèi)源性大麻素的含量。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1