[發明專利]N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑及其合成方法和用途

無效

• 申請號: 201310196609.6
• 申請日: 2013-05-24
• 公開（公告）號: CN103242262A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 傅瑾;李宇航;楊隆河;陳玲;朱程剛;邱彥
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C07D295/185
• 分類號: C07D295/185;C07D295/192;C07D207/14;C07D207/08;C07D317/60;C12Q1/02
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種N-脂肪酰基乙醇胺水解酶（NAAA）抑制劑及其的合成。

背景技術

棕櫚酸乙醇胺（PEA）是一種內源性的具有保護性的調節物質，可以通過直接激活細胞核受體過氧化物酶體增殖物激活受體-α（PPAR-α），產生抗炎、鎮痛等多種藥理作用，可作用于中樞及感覺神經系統、免疫細胞等多個靶點而發揮鎮痛抗炎作用（Mol?Pharmacol2005,67,15-19）。N-脂肪酰基乙醇胺水解酶（NAAA）能夠特異性地水解PEA，使PEA在體內處于一種較低的水平（FEBS?Lett,1999,454,267-270），NAAA抑制劑可以有效地抑制NAAA活性，抑制PEA水解，提高PEA水平，達到治療疼痛和炎癥的作用（Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A,2009,106,20966-20971）。相比中樞類鎮痛藥，NAAA抑制劑的作用主要發生在外周系統以及炎癥部位（Biochem?J,2004,380,749-756），對中樞神經系統影響比較小，無成癮性；相比阿斯匹林等COX抑制劑型抗炎鎮痛藥，不會引起腸胃出血，具有更好的藥物安全性。

發明內容

本發明旨在提供一種N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑及其合成方法和用途。

所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的結構如下：

式中：A可以是-H，-CH₃或-CH₂OH；B可以是-H，-CH₃，-NH₂，-OH或=O；C可以是CO，SO，SO₂；D可以是含有15個C原子以內的各種取代或未取代的：直鏈烷基，支鏈烷基，環烷基，烯基，炔基或芳香基。

所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的合成路線如下：

所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的合成方法，包括以下步驟：

1）將吡咯烷衍生物和堿加入有機溶劑中，再加入相應的酰氯，反應得到含有相應的酰基吡咯烷的反應液；

2）在步驟1）所得的反應液中加入水進行淬滅反應，無機相用有機溶劑萃取，即可得到酰基吡咯烷的粗產物，經提純得N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑。

在步驟1）中，所述有機溶劑可采用非極性有機溶劑，所述非極性有機溶劑可選自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、四氫呋喃、C2～C8的醚類、乙酸乙酯、丙酮等中的至少一種，所述有機溶劑的用量不限；所述吡咯烷衍生物與酰氯的物質摩爾比可為1∶（1.2～2）；所述堿可采用無機堿或有機堿，所述堿可選自碳酸鈉，碳酸鉀，氫氧化鈉，氫氧化鉀，三乙胺，吡啶等中的至少一種；所述吡咯烷衍生物與堿的物質摩爾比為1∶（1.5～2）；所述反應的時間可為1～5h，反應的溫度可為0～60℃。

所制得的N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑的抑制活性可以通過以下方法檢測：

將純化的N-脂肪酰基乙醇胺水解酶蛋白與濃度梯度的待篩選化合物于37℃共同作用，加入含底物17∶1N-脂肪酰基乙醇胺的緩沖液再反應。加入含有脂肪酸的甲醇液終止反應。用HPLC-MS檢測水解產物17∶1FA的產量，用Graphpad?Prism5作圖，以此測定得到待測化合物對N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的IC₅₀值。

所述所制得的N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑可用于檢測細胞內PEA水平影響。所述N-脂肪酰基乙醇胺水解酶抑制劑對細胞內PEA水平影響可通過以下方法檢測：細胞與待測化合物共孵育4h，后用甲醇/水（1∶1，體積比）收集細胞，超聲破碎細胞后用氯仿萃取；離心收集下層有機層，氮氣吹干后用合適的溶劑重新溶解后用LC-MS檢測PEA的含量。

棕櫚酸乙醇胺（PEA）是一種內源性的具有保護性的調節物質，具有抗炎，鎮痛等多種藥理作用。N-脂肪酰基乙醇胺水解酶（NAAA）是PEA的特異性水解酶，NAAA抑制劑可以抑制NAAA的活性，提高體內的PEA水平，有潛在的抗炎鎮痛的藥理作用。

附圖說明

圖1為3000rpm離心收集下層有機層，氮氣吹干后用3∶1甲醇/氯仿100μL重新溶解后用LC-MS檢測內源性大麻素的含量。

具體實施方式

實施例1