[發明專利]一種制備柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法

無效

• 申請號: 201310194650.X
• 申請日: 2013-05-23
• 公開（公告）號: CN103265590A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 蘇劉花;萬冬梅
• 申請（專利權）人: 南京澤朗農業發展有限公司
• 主分類號: C07H15/256
• 分類號: C07H15/256;C07J17/00;C07H1/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于天然藥物化學領域，特別是涉及一種制備柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法。

背景技術

柔毛山黧豆甙Ⅰ（Palustroside）為三萜苷類活性成分，白色粉末，分子式C₄₂H₆₈O₁₅，分子量812.99，主要來源于豆科(Leguminosae)?柔毛山黧豆?Lathyrus?palustris?L.var.pilosus?Ledeb.的地上部分。現代研究表明，柔毛山黧豆的地上部分中含有大量黃酮類物質，具有顯著的保肝作用。在體外免疫肝損害中,對培養的大鼠肝細胞有保護作用。劑量90μM時，保護率46%；200μM時，保護率86%。

通過檢索，國內尚未見采用高速逆流色譜分離技術制備柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法的相關報道。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷和不足，提供一種制備柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種制備柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法，其特征在于以下步驟：

（1）取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解4-7天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，得到提取液；

（2）提取液過濾后用超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，所得濃縮液用正丁醇萃取，萃取液濃縮得粗提物；

（3）把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監測，收集目標成分，減壓干燥得柔毛山黧豆甙Ⅰ。

步驟（1）中所述的生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶，用量為原料量的3-5‰。

步驟（2）中所述的超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素超濾膜，納濾膜為截留分子量200-400的中空纖維素納濾膜。

步驟（3）中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統為乙酸乙酯-正丁醇-水組合，比例為3-5:2-4:5-7，下相為流動相，上相為固定相。

本發明采用生物酶發酵，可以縮短提取周期，提高提取率；采用膜過濾技術分離，物理方法除雜，操作簡單，不污染環境；采用高速逆流色譜分離，分離速度快，樣品無損失，溶劑可以循環使用，制備量大。

具體實施方式：

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明。

實施例1：

取纖維酶15g溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌勻，常溫酶解5天，酶解原料用70℃溫水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液過濾后用截留分子量2000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量200的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積正丁醇萃取3次，萃取液濃縮得粗提物12g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:2:5混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉主機900rpm，泵入下相做流動相，待系統平衡后，流速調節為2.5ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器監測，收集目標流分，連續制備，合并流分減壓干燥得白色柔毛山黧豆甙Ⅰ702mg，經HPLC檢測，純度98.2%。

實施例2：

取淀粉酶5和果膠酶10g溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌勻，常溫酶解4天，酶解原料用60℃溫水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液過濾后用截留分子量6000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量300的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積正丁醇萃取3次，萃取液濃縮得粗提物13g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按5:4:7混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉主機850rpm，泵入下相做流動相，待系統平衡后，流速調節為2.5ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器監測，收集目標流分，連續制備，合并流分減壓干燥得白色柔毛山黧豆甙Ⅰ598mg，經HPLC檢測，純度97.7%。

實施例3：