[發明專利]一種用于檢測霍亂弧菌的F0F1-ATPase旋轉分子馬達傳感器試劑盒

無效

• 申請號: 201110336039.7
• 申請日: 2011-10-31
• 公開（公告）號: CN103088111A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 張捷;張惠媛;張昕;盧曉宇;汪琦;陸琳;張雷;劉巖;顧德周;陳廣全
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/42;C12Q1/04;C12R1/63
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是關于食品微生物快速檢測技術的一種。

背景技術

傳統的霍亂弧菌檢測方法要求對每個檢驗項目進行非選擇性增菌、選擇性增菌、分離、篩選和鑒定等步驟，一般需要4天才能出具檢測報告，嚴重影響貨物的品質和貨架壽命。一些新的技術如PCR技術、免疫學檢測技術、生物芯片技術等檢測方法仍依賴于傳統的檢測步驟，即需要進行增菌，耗時耗力，完成一次檢測通常需要幾天的時間。這樣不僅增加了實驗室的工作量，而且也不利于食品工業中生產流程的監測、終產品的質量控制以及政府部門對食品安全的管理和控制。

發明內容

以受控分子馬達技術為核心，集成核酸探針識別、熒光探針標記與檢測等技術，建立了一個全新概念的快速檢測技術體系。利用ATP酶作為載體對目標物進行檢測具有靈敏度高、特異性強、快速的特點。在F₀F₁-ATPase分子馬達連接上特異的核酸探針，可以實現對特定食品微生物的快速、特異性、高通量的檢測。本發明可將檢測時間縮短至2天，且檢測靈敏度能達到10²CFU/ml，滿足現有的食品微生物檢測范圍。

附圖說明

附圖1為分子馬達生物傳感器模式圖(其中a、b、c、α、β、δ、γ、ε均為ATP合酶亞基)，1為ε亞基抗體，2為鏈霉親和素(Strptavidin)，3為N-biotin，4為ompW探針，5為霍亂弧菌單鏈DNA。

附圖2為chro?ompW對不同種菌株的檢測結果，縱坐標表示熒光值，橫坐標表示檢測的樣本，其中1為水，2為霍亂弧菌，3為副溶血性弧菌，4為沙門氏菌，5為單增李斯特氏菌，6為大腸桿菌。

附圖3為chro?ompW對30株霍亂弧菌樣本的檢測結果，縱坐標表示熒光值，橫坐標表示檢測的樣本，1～30為食品檢測樣本編號。

具體實施方式

根據霍亂弧菌ompW基因設計特異性核酸探針5’-caccaagaaggtgactttattgtg，其中探針的5’用生物素進行標記。將該探針通過生物素抗體連接在分子馬達上面，利用分子馬達傳感器即可對待測樣本的DNA進行檢測，當樣品為霍亂弧菌DNA時，檢測體系的熒光值會發生明顯的變化，通過這一變化即可判斷樣本為陽性。為此，我們設計了一個試劑盒，可以方便、快速對食品中的霍亂弧菌進行檢測。

試劑盒組成：