[發明專利]一種從遠志中制備3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的方法

有效

• 申請號: 201310193861.1
• 申請日: 2013-05-21
• 公開（公告）號: CN103265584A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 欒連軍;施琦淵;吳永江;劉雪松;雷后亮
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07H13/04
• 分類號: C07H13/04;C07H1/08
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種從遠志中制備高純度3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的方法。

背景技術

3,6’-二芥子酰基蔗糖酯（3,6’-disinapoylsucrose,?DISS）是一種酰化寡糖，分子式：C₃₄H₄₂O₁₉，分子量：754.23，淡黃色無定形粉末。分子結構式如下：

3,6’-二芥子酰基蔗糖酯具有明確的抗抑郁作用，能明顯改善抑郁模型小鼠行為學指標，可增強5-HT?系統功能，并能夠保護受損的神經細胞，對慢性應激大鼠HPA軸激素水平具有調節作用，增加抑郁動物海馬中磷酸化CREB表達，并提高CREB下游靶基因BDNF的mRNA及蛋白的表達。

3,6’-二芥子酰基蔗糖酯主要來源于遠志Polygala?tenuifolia?Willd.或卵葉遠志Polygala?sibirica?L.的干燥根，藥材中3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的含量為0.50%以上。

糖酯類為遠志藥材的重要指標成分，2010版《中華人民共和國藥典》遠志項下增加了3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的含量測定，作為藥材質量評價指標。近年來的研究表明，以3,6’-二芥子酰基蔗糖酯為代表的遠志糖酯類成分具有抗抑郁、抗老年癡呆、腦神經保護等顯著的藥理學活性，具有潛在的新藥開發前景，日益受到國內外學者關注。

目前，尚無制備高純度的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的專利報道。2010年潘瑞樂等^[1]公開發表了“高速逆流色譜分離純化遠志中3,6’-二芥子酰基蔗糖酯和遠志蔗糖酯A”一文，采用制備型高速逆流色譜分離（HSCCC）法，以乙酸乙酯-正丁醇-水（4：l：5）為溶劑系統分離純化制備3,6’-二芥子酰基蔗糖酯和遠志蔗糖酯A。該法使用了高沸點溶劑正丁醇，在后處理過程中需要較高溫度回收溶劑，而3,6’-二芥子酰基蔗糖酯類于結構中含有酯鍵、糖苷鍵及共軛體系，易受酸堿、高溫和光照的影響而發生結構變化^[2]。該方法從500g遠志藥材中僅分離得到24.6mg純度為93％的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯，收率較低（小于1%）、成本高。據調研，目前市售的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯對照品的純度大多在90%左右，無法滿足科研及新藥研發需求。

發明內容

本發明提供一種高純度3,6’-二芥子酰基蔗糖酯制備方法，通過以下步驟實現：

(1)???提取：以遠志藥材為原料，加入水、乙醇或它們的混合溶劑進行提取；

(2)???富集：將步驟（1）所得提取物加入大孔吸附樹脂，采用不同濃度乙醇梯度洗脫，富集3,6’-二芥子酰基蔗糖酯；

(3)???純化：將步驟（2）富集得到的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯用反相中壓層析進行純化，以乙醇-乙腈-水溶液為洗脫溶劑進行洗脫，合并相同流分，50℃以下避光減壓濃縮至干即得3,6’-二芥子酰基蔗糖酯。

具體的，所述步驟（1）為以遠志藥材為原料，加入水、乙醇或它們的混合溶劑作為提取溶劑，藥材與提取溶劑質量體積比為1：4~1：20（kg/L），采用加熱、超聲或滲漉提取方式，提取2-3次，合并提取液，50℃以下避光減壓濃縮至干。

具體的，所述步驟（2）為將步驟（1）所得提取物加水分散后，經4000r/min離心30min，取上清液加入大孔吸附樹脂，依次用體積分數為0%、30%、50%的乙醇溶液進行洗脫，合并含3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的流分，50℃以下避光減壓濃縮至干。藥材與樹脂用質量體積比為1：1~1：2（kg/L）。

具體的，所述步驟（3）為以乙醇-乙腈-水混合溶液為洗脫溶劑（混合溶液中有機相的體積分數為15%~20%；有機相中乙醇與乙腈的體積比為3：1），將步驟（2）富集得到的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯，加洗脫溶劑溶解后，經4000r/min離心30min，加入C18反相中壓層析柱進行純化，合并相同流分，50℃以下避光減壓濃縮至干即得3,6’-二芥子酰基蔗糖酯。

優選的：所述步驟（1）為以遠志藥材為原料，加入10倍量體積分數為60%的乙醇溶液，回流提取2次，每次2小時，濾過，合并提取液，50℃避光減壓濃縮至干。