[發明專利]一種制備高腺苷含量的蟲草制劑的方法

有效

• 申請號: 201310193640.4
• 申請日: 2013-05-23
• 公開（公告）號: CN103271951A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 臺建祥;何建;劉曉偉
• 申請（專利權）人: 臺建祥;何建;劉曉偉
• 主分類號: A61K36/068
• 分類號: A61K36/068;A61K35/64
• 代理公司: 北京萬科園知識產權代理有限責任公司 11230
• 代理人: 劉俊玲;張亞軍

1.一種制備高腺苷含量的蟲草制劑的方法，包括以下步驟：

1）將分離自蟲草子實體的真菌類菌株經固體培養和搖床培養后，得到菌絲體；

2）將步驟1）得到的菌絲體接種到含有木薯蠶蛹水提液的培養液中進行深層發酵，得到深層發酵菌絲體；

3）超高壓處理步驟2）得到的深層發酵菌絲體，使菌絲體和微生物瞬間破壁；然后離心發酵液，分離得到菌絲體和菌液；

4）步驟3）得到的菌液精濾后經低溫濃縮制成高腺苷含量的蟲草口服液，菌絲體經低溫干燥后，超微粉碎成高腺苷含量的納米級蟲草微粉。

2.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1）所述的分離自蟲草子實體的真菌類菌株選自中華被毛孢、蝙蝠蛾擬青霉、被包霉屬、北蟲草菌r3或頭孢菌改良菌株A10中的任意一種。

3.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1）所述的分離自蟲草子實體的真菌類菌株為中華被毛孢菌株。

4.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1）所述的固體培養是在PDA斜面培養基中培養，按重量份計，所述的PDA斜面培養基中含有10-20%的馬鈴薯、2-3%的葡萄糖、1-3%的瓊脂；所述的固體培養條件優選18-25℃，pH值為5-6，培養時間為8-10天；步驟1）所述的搖床培養條件是溫度為18-25℃，轉速為180-210rpm，時間為2-5天。

5.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟2）所述的深層發酵培養液中，每1000毫升中含有由1-12g干重的木薯蠶蛹粉制得的水提液。

6.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟2）所述的深層發酵培養液每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液30-100毫升（v/v），由1-12克木薯蠶蛹干粉制得的水提液，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值為5-6。

7.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟2）所述的深層發酵過程，接種量為5-15%v/v，溫度18-25℃，壓力0.6-0.8Kg/cm²，攪拌速率為100-260rpm，通氣量為1:0.5～1:12，發酵時間為3-6天。

8.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟3）所述的超高壓處理是將步驟2）得到的發酵液在低于60℃的常溫或較低溫度下，用100-400MPa的壓力處理5-10分鐘。

9.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟3）所述的離心是采用高速離心機在3000-3500rpm下離心10-15分鐘。

10.權利要求1所述的制備高腺苷含量的蟲草制劑的方法，包括以下步驟：

1）將中華被毛孢菌株轉接于PDA斜面培養基上，進行培養，活化，所用培養基中，按重量百分比計，含有10-20%馬鈴薯，2-3%葡萄糖，1-3%瓊脂；培養條件為18-25℃、pH值5-6，培養8-10天；挑取菌絲體接種于裝有液體培養基的搖床中培養，所述的液體培養基每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液30-100毫升，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值為5-6；搖床培養溫度為18-25℃，轉速為180-210rpm，培養2-5天；

2）將步驟1）搖床培養得到的菌絲體，接種至裝有培養液的發酵罐中，接種量為5-15%（v/v），所述的培養液每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液30-100毫升，由1-12克木薯蠶蛹干粉制得的水提液，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值為5-6；發酵罐保溫18-25℃，罐壓0.6-0.8Kg/cm²，攪拌速率為100-260rpm，通氣量為1:0.5～1:12，發酵3-6天，得到深層發酵的菌絲體；

3）在低于60℃的溫度下，用100-400MPa的超高壓方法處理步驟2）得到的深層發酵菌絲體5-10分鐘；然后在3000-3500rpm下離心10-15分鐘，分離得到菌絲體和菌液；

4）將步驟3）得到的菌液經微濾、超濾和濃縮制成高腺苷含量的蟲草口服液；將步驟3）得到的菌絲體50℃干燥后，超微粉碎制成高腺苷含量的納米級蟲草粉。