[發明專利]一種昆蟲表皮碳氫化合物組分的分析方法有效
| 申請號: | 201310192892.5 | 申請日: | 2013-05-22 |
| 公開(公告)號: | CN103293241A | 公開(公告)日: | 2013-09-11 |
| 發明(設計)人: | 張帥;崔金杰;王春義;雒珺瑜;呂麗敏 | 申請(專利權)人: | 中國農業科學院棉花研究所 |
| 主分類號: | G01N30/02 | 分類號: | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司: | 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262 | 代理人: | 武晶晶;高瑜 |
| 地址: | 455000 河*** | 國省代碼: | 河南;41 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 昆蟲 表皮 碳氫化合物 組分 分析 方法 | ||
技術領域
本申請涉及植物保護技術領域,具體地涉及一種昆蟲分析方法,更具體地,涉及一種昆蟲表皮碳氫化合物組分的分析方法。
背景技術
昆蟲信息素是生物體之間起化學通訊作用的化合物的統稱,是昆蟲交流的化學成分。昆蟲信息素是一類碳氫化合物,它們是同種個體之間相互作用的化學物質,能影響彼此的行為、習性,乃至發育和生理活動。信息素由體內腺體合成,直接排出體表,分布在體表或散發到體外。信息素依靠接觸、空氣、水等傳導媒介傳給其它個體。信息素主要有性信息素、聚集信息素、報警信息素、示蹤信息素和標記信息素等。
性信息素由性成熟昆蟲釋放至空氣中后隨氣流擴散,刺激異性觸角中的化學感覺器官,引起異性個體性沖動及引誘雄蟲向釋放源定向飛行,并與釋放性信息素成蟲交配以繁衍后代。聚集信息素能夠招引同種其他個體前來一起棲息,共同取食,攻擊異種對象,從而形成種群聚集。白蟻、蜜蜂、螞蟻等昆蟲組成幾十萬只個體共同生活的群體,聚集信息素在群體生活中起主要作用。報警信息素是當某一昆蟲個體受到敵害攻擊侵擾時,所發出一種特殊的化學信號物質,使同伴得到信號以后,引起警覺或逃避。蚜蟲受到敵害侵襲時,從腹管中放出微量化學物質,警告同伴離開。蜜蜂、螞蟻等群體生活的昆蟲都有較多的報警信息素。蜜蜂的報警信息素由大顎腺產生的2-庚酮和螫腺產生的異戊基乙酸酯混合組成。當外敵侵害蜂巢時,執勤工蜂一齊向外敵進攻,直到外敵消除方才安靜下來。示蹤信息素多數為蟻類所分泌,它們用這種物質標記路線,使其它的蟻按原路找到合適的食物。被霉菌腐爛的木頭所產生的一種物質能引誘東方地下白蟻,并已證明為東方或南方地下白蟻追跡信息素,其結構為3Z,6Z,8E-12:OH。許多昆蟲的性信息素都有專一性,而追跡信息素無專一性。標記信息素多為昆蟲產卵后標記在產卵部位的碳氫化合物,引誘或阻止其它昆蟲產卵。
昆蟲體壁上附著大量的碳氫化合物,昆蟲體壁碳氫化合物對于昆蟲來說是重要的相互識別信息化合物,主要用于群居昆蟲個體的相互識別,天敵對寄主的識別等。此外,昆蟲體壁碳氫化合物的組分在昆蟲分類中也是重要的指標。信息素物質從體壁內部向外分泌,體壁上存在控制信息素物質釋放速度的特殊組織結構,體壁內的水分用于鎖定信息素物質。目前分析信息素物質的方法多采用有機溶劑二氯甲烷直接浸泡提取昆蟲體壁的碳氫化合物,然后進行GC-MS分析。使用該技術能夠分離小分子碳氫化合物,但對于分子量較大的種類,由于不能萃取出能夠被GC-MS檢測出的足夠量,而無法分析出種類。分子量較大的信息素物質與體壁結合較為緊密,直接用有機溶劑提取時,如果提取時間太短,由于體壁水分的封鎖,不能充分地提取昆蟲體表較深層的碳氫化合物;如果提取時間過長,由于昆蟲體內物質經由口器或肛門逸出,可能把體內的物質也提取出來,兩種情況都會影響實驗結果。
發明內容
本申請的目的是提供一種昆蟲表皮碳氫化合物組分的分析方法。
本申請提供了一種昆蟲表皮碳氫化合物組分的分析方法,包括:
將昆蟲冷凍干燥;
將冷凍干燥后的昆蟲用有機溶劑進行萃取;
取萃取液,進行GC-MS分析。
在一個實施方案中,在所述冷凍干燥步驟前將昆蟲進行麻醉,優選在密閉容器內使用麻醉劑進行麻醉。
在一個實施方案中,所述的麻醉劑是無機麻醉劑,優選是二氧化碳。
在一個實施方案中,所述麻醉的時間是15-180秒。
在一個實施方案中,所述冷凍干燥步驟包括使用液氮進行速凍后立即放入凍干機進行凍干。
在一個實施方案中,所述凍干的條件為冷阱溫度-64℃至-84℃,真空度0.01mbar以下,凍干時間為12-24h。
在一個實施方案中,所述有機溶劑是丙酮、氯仿、乙醇、二氯甲烷或正己烷,優選二氯甲烷或正己烷。
在一個實施方案中,所述萃取時間為1-6h。
在一個實施方案中,所述取萃取液的步驟包括吸取萃取后的上清液并進行濃縮。
在一個實施方案中,所述的昆蟲是綠盲蝽。
本申請的方法可以檢測多種昆蟲,包括但不限于綠盲蝽、棉鈴蟲、蜜蜂、家蠶等。
本申請的方法首先將活體昆蟲冷凍干燥,然后萃取其體壁碳氫化合物。這樣可以最低限度減少昆蟲自身所帶的水分對萃取的干擾,以提高萃取的高分子量體壁碳氫化合物的含量和質量,分離出現有技術的方法無法分離出的成分,使得能夠檢測出更多種類的高分子量體壁碳氫化合物,以便對其進行進一步的研究。
附圖說明
圖1顯示使用二氯甲烷直接提取綠盲蝽體壁碳氫化合物的GC-MS分析結果。
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