[發明專利]櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白（CfPGRP-S1）的應用

有效

• 申請號: 201310192697.2
• 申請日: 2013-05-22
• 公開（公告）號: CN103319590A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 宋林生;劉瑞;邱麗梅;衣啟麟;張峘
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;A61K38/17;A61P37/04;A23K1/16
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明屬于水產生物技術領域，具體的說是一種櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白（CfPGRP-S1）的應用。

背景技術

免疫增強劑是指能夠促進或誘發宿主防御反應，增強生物機體抗病能力的一類物質。因其具有安全、廣譜、高效、無毒、無污染、低成本等諸多優點，目前已在畜牧養殖中作為飼料添加劑廣泛應用。但快速發展的水產養殖業所需的免疫增強劑的開發和應用仍處于起步階段，其中較為關鍵的就是解決活性物質的導入技術和應用方法的難題。

表面展示（Surface?display）技術是一種較新的基因工程技術，它使表達的外源肽或蛋白質以融合蛋白形式展現在噬菌體或細胞的表面，被展示的多肽或蛋白質可以保持相對獨立的空間結構和生物活性，借以研究多肽（蛋白質）的性質、相互識別和作用等。目前利用酵母菌進行表面展示的技術已發展相對成熟，其中利用酒精酵母表面展示的系統已經完全商品化。

肽聚糖識別蛋白（peptidoglycan?recognition?protein，PGRP）是固有免疫模式識別受體的一種，在免疫應答過程中起重要作用。

發明內容

本發明目的在于提供一種櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白（CfPGRP-S1）的應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白（CfPGRP-S1）的應用，

序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列的櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白CfPGRP-S1表面展示酵母可作為抗WSSV病毒的免疫增強劑。

進一步的說，所述櫛孔扇貝肽聚糖識別重組蛋白CfPGRP-S1可作為抑制WSSV病毒復制和提高凡納濱對蝦抗WSSV能力的免疫增強劑。

進一步的說，所述櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白CfPGRP-S1經表面展示表達于解脂耶羅威亞酵母（Yarrowia?lipolytica）的細胞表面，得到的櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白CfPGRP-S1酵母菌可直接作為抗WSSV病毒的免疫增強劑。

所述序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列的櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白CfPGRP-S1表面展示的過程為：

1）以櫛孔扇貝CfPGRP-S1編碼區為模板，采用P1和P2為引物進行PCR擴增，待用；

2）PCR擴增產物與pMD18-T載體通過T4連接酶連接，而后將連接產物與表面展示載體經HindIII，BamHI雙酶切后連接；

3）將上述構建載體轉入解脂耶羅維亞菌株中進行誘導培養，即得到具有序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列的重組蛋白CfPGRP-S1菌株，該菌株經免疫熒光檢測證明CfPGRP-S1可被正確表達；

所述因為P1和P2分別為P1：5’-CGCAAGCTTATTACAGCTGATTACCTGATAACAG-3’；P2：5’-CGCGGATCCATGATGATGATGATGATGAGGGCATCCCGGACCAT-3’。

本發明所具有的優點：

本發明將櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白（CfPGRP-S1），表面展示于被認為安全的微生物解脂耶羅威亞酵母（Yarrowia?lipolytica）上。

CfPGRP-S1不僅可以結合多種病原相關分子模式、直接殺滅各種外源微生物，還可以抑制病毒復制、增強機體免疫，是一種重要的具有巨大潛在應用價值的免疫分子，而且經表面展示的CfPGRP-S1酵母菌可直接應用，不需要經過提純。因而實施本發明具有生產成本、應用簡便，效果多重等特點，預期將在水產養殖領域具有廣泛的應用前景。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白（CfPGRP-S1）酵母菌株可提高凡納濱對蝦WSSV感染后的存活率的效果圖。

圖2為本發明實施例提供的櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白（CfPGRP-S1）酵母菌株可較低對蝦體內WSSV病毒的拷貝數的效果圖。

具體實施方式

下面的實驗例中將對本發明作進一步的闡述，但本發明不限于此。實驗例1

櫛孔扇貝CfPGRP-S1酵母表面展示氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO.1中所示。

SEQ?ID?NO.1