[發明專利]一種診斷舌癌的CRISP1試劑盒的應用

有效

• 申請號: 201310191230.6
• 申請日: 2013-05-22
• 公開（公告）號: CN103257240A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 朱進安
• 申請（專利權）人: 蘇州市馬爾泰新材料有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

技術領域

本發明涉及試劑盒的應用，具體地說，是關于診斷舌癌的CRISP1試劑盒的應用。

背景技術

舌癌早期可表現為潰瘍、外生與浸潤3種類型。有的病例的第一癥狀僅為舌痛，有時可反射至顳部或耳部。外生型可來自乳頭狀瘤惡變。浸潤型表面可無突起或潰瘍。潰瘍型及浸潤型癌常伴有自發性疼痛和程度不同的舌運動受限；外生型一般舌運動障礙不明顯，較少自發痛。舌癌進入晚期可直接超越中線或侵犯口底，亦可浸潤下頜骨舌側骨膜、骨板或骨質。向后則可延及舌根或咽前柱和咽側壁。此時舌運動可嚴重受限、固定、涎液增多外溢。進食、吞咽、言語均感困難。疼痛劇烈，可反射至半側頭部。關于舌癌早期診斷的醫療器械目前還未見報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供診斷舌癌的CRISP1試劑盒的應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：一種診斷舌癌的富含半胱氨酸分泌蛋白1試紙在制備診斷舌癌的醫療器械中的應用，所述的試紙，包括底板、樣品墊、金膠墊、硝酸纖維膜層和吸水紙層，所述的底板上依次覆蓋樣品墊、金膠墊、硝酸纖維膜層和吸水紙層，所述的硝酸纖維膜層上含有牛血清白蛋白-唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1偶聯物的測試線和抗鼠二抗的質控線，所述的金膠墊上含有膠體金與抗唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1抗體結合形成的金標抗唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1抗體復合物，所述的試紙的診斷樣品是唾液，所述的試紙的檢測闕值為唾液富含半胱氨酸分泌蛋白1濃度10-40ng/ml。

本發明優點在于：提供了富含半胱氨酸分泌蛋白1的新用途，為舌癌的大規模人群篩查、舌癌術后病人的自我檢測提供方便、可靠、無創、價廉的方法，指導舌癌的治療；本發明的試紙檢測快速、靈敏度高、特異性強、穩定性好、操作簡便、無需任何儀器設備，而且結果判斷直觀可靠、易于掌握，同時也方便病人對病情自我監測。

附圖說明

附圖1是舌癌的CRISP1診斷試紙的結構示意圖。

附圖2是舌癌的CRISP1診斷試紙的檢測結果示意圖。

附圖3是舌癌的CRISP1診斷試紙的檢測過程示意圖。

具體實施方式

下面對本發明提供的具體實施方式作詳細說明。

下面結合附圖對本發明提供的具體實施方式作詳細說明。

附圖中涉及的附圖標記和組成部分如下所示：

1.底板???????????2.樣品墊

3.金膠墊?????????4.硝酸纖維膜層

5.吸水紙層???????6.唾液

7.層析方向

實施例1免疫組化

實驗材料：正常舌組織、舌癌組織；一抗為羊抗人CRISP1抗體，二抗驢抗羊Dylight594抗體。

實驗方法：

組織芯片就是將大量組織樣品有序地組合在一個微小基片表面,借助免疫組織化學的方法進行檢測。

1、將組織用PFA固定液固定5分鐘，PBS洗10分鐘

2、抗原修復：用0.01M檸檬酸鹽溶液暴露抗原決定族。微波爐高火3分鐘加熱修復液至沸騰（4分鐘），再連續低火微波1分鐘、兩次。冷卻至室溫，PBS洗10分鐘。用0.5%的Triton破膜10分鐘。

3、封閉非特異性蛋白

1)??PBS?浸泡3分鐘×3次

2)??3%?H₂O₂-甲醇（30%?H₂O₂10ml+甲醇90ml）室溫浸泡30分鐘

3)??自來水沖洗10分鐘，PBS?浸泡3分鐘×3次，甩干或紙巾吸去多余液體（勿碰到組織），用組化筆在組織周圍畫上圈（蒸餾水沖洗時間內配好10%封閉血清）

4)??在圓圈內組織內迅速滴入5%?BSA（用PBS配制），封閉非特異性抗原（勿讓組織干燥，應在紙巾吸掉水后立即加入），室溫30分鐘（配好一抗），扣掉封閉液，不洗。

4、一抗孵育

甩去切片上的BSA,用濾紙擦干組織周圍殘留BSA，直接加入已稀釋的羊抗人CRISP1抗體（約60μl），放入濕盒中4℃過夜。第二天從冰箱中取出需37?℃復溫30?min。

5、二抗孵育

1)??將一抗洗掉，將玻片插入塑料玻片架，然后整個放入塑料盒中，加PBS浸泡放于微型振蕩器上洗10分鐘。

2)??用濾紙將圓圈周圍的水吸去，加入二抗驢抗羊Dylight594抗體，室溫30分鐘。

3)??加PBS浸泡放于微型振蕩器上洗10分鐘。